1樓：南京金益柏生物科技****
既然你半定量就把內參校正好了，好做什麼real-time pcr，直接用半定量的結果就可以說明問題了。
顯然，我的做法是首先半定量確定引物的特異性（單一條帶，亮）其次，根據提取rna的濃度，大致保證反轉錄後所有的樣品濃度較為一致，也可以核酸測定儀準確確定濃度。
第三，real-time pcr後將樣品減去內參的ct值，內參本來就是消除誤差的。
即時定量pcr時用的roxrefence有什麼作用
2樓：北京索萊寶科技****
rox reference dye,可用於需要dye的real time pcr擴增儀，用以校正孔與孔之間產生的螢光訊號誤差。並不是每次都會用到。
一般有rox reference dye和rox reference dye ii兩種，針對不同的pcr儀。
我想問做即時定量pcr，需要注意些什麼
3樓：南京金益柏生物科技****
首先試劑準備好，包括合適長度的引物，cdna,螢光底物等等，不知道你現在準備到哪一步了。
然後要了解機器的執行軟體。引數的設定，特別是退火溫度等。
要做的時候，儘量在冰盒上操作，時間要快，螢光底物要避光，加樣準確。
如果你沒做過，建議找個做過的指導一下。
即時螢光定量pcr引物怎麼設計
4樓：南京金益柏生物科技****
1、查詢該物種或近緣物種資訊，看是否能確定內含子序列的位置，在cds上設計跨內含子的引物，以避免基因組汙染；
2、擴增片段大小最好在200bp左右，太大會影響擴增效率；
3、最好一次分別設計兩條上游（距離較近）和下游引物（距離較近），組合成4個擴增片段；
4、用任何方法或軟體設計好的引用都要用少量cdna樣本來驗證引物擴增效果：主要是有無二聚體？有無非特異性擴增？
5、篩選出一對最滿意的引物上機，祝你實驗順利。
即時定量pcr最終出來的結果為什麼是負值
5樓：南京金益柏生物科技****
可以是負的，這很正常，和你測試的資料相關係，如果沒搞錯，負值還是有的。
請問螢光定量pcr為什麼要使用雙內參呢？
6樓：南京金益柏生物科技****
你提供的檔案非常好，只是沒有涉及雙內參的問題，我的實驗用了兩個內參基因，現在問題是不知道怎麼處理這樣的資料。謝謝你的回答~
7樓：圖拉的草原
樓主，我現在也遇到這樣的問題了，能不能把你最後怎樣處理雙內參的方法告訴我，萬謝了！
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