1樓：匿名使用者
你先得弄清相來對定量什麼自
意思，舉個例子，樣bai品a和樣品b中檢測基因duy的表達水平，以b-actin為內
zhi參，相對定量就dao是用樣品a中的基因y的量除以b-actin得到值y1，用樣品b中的基因y的量除以b-actin得到值y2，然後y1/y2就是基因y在樣品a和b中的相對錶達水平。若基因y和b-actin擴增效率不一致，那麼y1/y2就不能反映實際情況了。
擴增效率是由退火溫度和引物效率決定的，需要試多個退火溫度和多對引物，希望有幫助
2樓：匿名使用者
相對定量有抄兩種方法。要求擴增效率相同的是δδct法，因為只有擴增效率相同目的基因與內參基因的ct值之差才是恆定的值，這是使用這種方法處理資料的前提，所以正式實驗之前要進行條件優化，這種方法的優勢是不用作標準曲線。如果擴增效率不同就要用另一種雙標準曲線法，這種方法需要標準品，稀釋不同的濃度梯度，作標準曲線，根據標準曲線得到你的拷貝數在進行資料處理，得到相對值。
希望能對你有幫助……
熒光定量pcr，實驗組和對照組的目的基因ct值非常相近，兩組內參基因的ct值相差5左右，正常嗎？
3樓：何曼婷囖
回答如下：
不正常。熒光定量pcr通過以內參基因作為標準進行相對定量，即眾所周知的2–δδct 法，（前提是要求在所有測試樣本中恆定表達的已知參照基因，而且表達水平不受研究條件及處理方式的影響）。
如果實驗組和對照組的目的基因ct值非常接近（前提是cdna稀釋的倍數一致）， 說明二者的目的基因無明顯變化呀。
基因作用：
基因有控制遺傳性狀和活性調節的功能，基因通過複製把遺傳資訊傳遞給下一代,並通過控制酶的合成來控制代謝過程,從而控制生物的個體性狀表現。基因還可以通過控制結構蛋白的成分,直接控制生物性狀。
生物體細胞中的dna分子上有很多基因,但並不是每一基因的特徵都表現出來。即使是由同一受精卵發育分化而來的同一人體不同組織中的細胞,如肌肉細胞、肝臟細胞、骨細胞、神經細胞、紅細胞和胃黏膜細胞。
細胞核中的基因在細胞的一生中並非始終處於活性狀態,它們有的處於轉錄狀態,即活性狀態,這時基因開啟,有的處於非轉錄狀態,即基因關閉。
第一次做熒光定量pcr，內參基因能夠跑出來，而且溶解曲線也比較好，但是目的基因完全跑不出來
4樓：匿名使用者
問題有可能如下
bai：
1） 模板du製備有問題。你可以用普通
zhipcr擴增，然後dao電泳確定是不是專模板有問題？
2） 引物問屬題：引物設計的好與否，對realtime 結果至關重要！ 可以用普通pcr確定你的引物擴增效率如何？ 模板可以選取一個陽性質粒當模板。
3） realtime 體系配置出問題：好好想一下，該加的東西都加了沒？模板、染料、taq酶、等。
並且各個試劑的量一定要確定沒問題！
4） 程式設定：儀器的程式設定，plate的編排、退火溫度、等等。
祝你好運！！！
5樓：匿名使用者
沒有學過，高中化學也很差，所以，不知道！！！
抱歉啊，幫不了你！！！
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