1樓:為青生物
找個教程看看。
先設定基線,機器會自動設定,這個一般不用改。
然後設定閾值,閾值設定的不同,ct值會相差比較大
熒光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
2樓:匿名使用者
儀器配套軟體會直接給出來一個ct值,也可自己調節
3樓:匿名使用者
高於背景熒光強度的值被確定為閾值。
ct值: c代表cycle,t代表閾值(threshold),ct值的含義是:每個反迴應管答內的熒光訊號到達設定的閾值時所經歷的迴圈數。
控制在擴增曲線的指數增長階段範圍之內。閾值線與擴增曲線的交叉點確定 ct 值。具體見附圖。
4樓:匿名使用者
根據你初始設定的閾值最後由機器確定的
熒光定量pcr的結果(ct值)怎麼分析
5樓:匿名使用者
目的基因熒光達到閾值時的迴圈數~ct值越低代表起始模板數量越大~
請問:做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20
6樓:禾鳥
△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx0+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x0為初始模板量,ex為擴增效率,n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
熒光定量pcr的原理:
熒光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
7樓:一生一個乖雨飛
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。
當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
8樓:匿名使用者
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
9樓:匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱
求助關於熒光定量pcr的ct值問題
10樓:林顧姝
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下:
對照組基因a的ct值為20, 內參(比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。
首先算加樣量:delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍,所以4處以2=2,最後的相對量是2倍。
幾點注意:
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減(擴增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理論值,實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
11樓:琦桂花富羅
看了你空間裡的溶解曲線,你可以看到溶解峰的溫度都很低,全在80以下,你擴出來的東西多半隻是引物,你跑定量的時候有做ntc的孔嗎,如果有做,可以對照ntc組和加了模板的組,溶解峰還是一樣的話,那你擴出來的產物100%是引物了。
再有,你的擴增曲線問題,ct太了,一般做定量認為ct=25時,是一個模板擴出來的,所以當大於25擴出來的結果都不可信。
還有,你反轉錄的時候rna加多少,2微克?,反轉錄體系是多少,20微升?反轉錄之後按照多少比例稀釋,1比4?
總之,問題可以再問詳細一點,也可以直接hi我
如果做過ntc那溶解峰就沒問題了,而且都很單一,特異性蠻好的。沒稀釋的cdna做的定量,ct大於30?你p的什麼基因呢,表達量也太低了吧,內參的ct呢,也是這麼低嗎
定量pcr中ct值的定義
12樓:匿名使用者
ct值:c代表cycle,copyt代表threshold,ct值的含義是:bai每個反應管內的熒du光訊號到達設定的域值時zhi所經歷的迴圈數
daopcr反應的前15個迴圈的熒光訊號作為熒光本底訊號,熒光域值的預設設定是3-15個迴圈的熒光訊號的標準偏差的10倍
13樓:匿名使用者
每個反應管內的熒光訊號達到所設定的閾值時,所經歷的反應迴圈數。
做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼
14樓:北京索萊寶科技****
△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)
△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)
2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30
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