1樓:匿名使用者
所謂ct值,就是最先出
現超過閾值訊號的那個迴圈數。或者說是到了第幾個迴圈專才出現超過閾值的訊號。屬
c代表的是cycle,迴圈數目,t代表的是threshold,閾值。
所以表達量越少的話,需要越多的迴圈才能擴增出來。也就是ct值越高
2樓:匿名使用者
表達量越高ct值越小,成反比。
pcr ct值越高是否說明表達越低,△ct值越高說明表達也低,是嗎?
3樓:匿名使用者
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下:
對照組基因a的ct值為20, 內參(比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。
首先算加樣量:delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍,所以4處以2=2,最後的相對量是2倍。
幾點注意:
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減(擴增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理論值,實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
4樓:匿名使用者
你參考一下我以前的回答
請問我在做熒光定量pcr的時候內參的ct值很低大約在35左右,而目的基因ct值在25左右 有哪位高手能指點一下
5樓:匿名使用者
你選了個什麼內參,表達量如此之低?感覺有點問題,檢查一下融解曲線對不對。
如果是正確的,說明你的目的基因表達量比內參高出一千倍啊。
ct值越大,表達量越低。
6樓:糟油酒丸
看看你的gapdh引物tm多少,有可能是因為pcr條件適合目的基因引物對而不適合內參引物對嗎?
請問:做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20
7樓:禾鳥
△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx0+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x0為初始模板量,ex為擴增效率,n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
熒光定量pcr的原理:
熒光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
8樓:一生一個乖雨飛
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。
當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
9樓:匿名使用者
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
10樓:匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱
熒光定量pcrct值每次重複相差多少
11樓:
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下:
對照組基因a的ct值為20, 內參(比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。 首先算加樣量:
delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。。
實時定量pcr的ct值在什麼範圍內算作合理
12樓:染目黒曈
通常情況bai下,我們du認定為15到zhi35ct比較合理,超過35個ct那麼就算它沒dao有擴專增了,如果15之前起峰屬
,那麼就是模板濃度太高所引起的
在熒光定量pcr技術中,有一個很重要的概念 —— ct值。c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是:每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數
恆溫pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別？哪個
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。pcr 聚合酶鏈式反應 是利用dna在體外攝氏95 高溫時變性會變成單鏈，低溫 經常是60 c左右 時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna...
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