螢光定量PCR中質粒標準品拷貝數計算問題

2025-07-19 10:50:27 字數 1902 閱讀 6045

1樓:網友

od260×40×稀釋倍數,這個其實沒用,一般測出來直接就是待測樣本濃度(ng/ul),不需要換算。

如何計算質粒的拷貝數(copies)?

2樓:月似當時

拷貝數計算公式:copies/ml(拷貝數)=( x 10(23)次拷貝數/摩爾) x (濃度) / (mw g/mol)。

細菌細胞中,某種特定質粒的數目。根據複製特性,質粒分嚴緊型和鬆弛型兩類,前者在細胞中只含1~2個,而後者含10~15個以上。

恆定的拷貝數與質粒複製控制系統、宿主細胞遺傳背景及生長條件有關。

質粒複製控制系統首先通過調節複製的起始點來控制拷貝數,調節因素包括阻遏蛋白、反義rna和某些順向重複序列。

有些質粒還有其他控制系統,如有分配功能的par系統和確保質粒穩定遺傳的ccd系統。一旦質粒上與調控有關的基因或位點突變,可使拷貝數明顯增加或減少。

3樓:給股尕

mw 代表 克/摩爾,單位dolton:1dolton即表示 1g/mol

1 摩爾= x 10(23)次摩爾分子(拷貝數)平均分子量(mw):

dsdna=(鹼基數) x (660 道爾頓/鹼基)ssdna=(鹼基數) x (330 道爾頓/鹼基)ssrna=(鹼基數) x (340 道爾頓/鹼基)得到拷貝數計算公式:

即:( x 10(23)) x (g/ml) / (dna length x 660) = copies/ml.或( x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) )/ (dna length x 660) = copies/ul.

通過螢光定量pcr如何計算基因拷貝數

4樓:網友

要得到確切的基因拷貝數,一定要做絕對定量,即用一系列已知拷貝數的標準品做標準曲線,然後根據ct值計算出樣本的起始模板的拷貝數。

y=klgx+b

x=10^((ct-b)/k)得到起始模板拷貝數ps:樣本的拷貝數要在標準曲線之內,如果超出了就要選能包含樣本的標準品。

5樓:網友

通過標準品的ct值和測得的標準曲線進行計算。

6樓:網友

pcr 反應體系中加入非特異性的螢光染料(如: sybr green i )或特異性的螢光探針(如: taqman 探針),即時檢測螢光量的變化,獲得不同樣品達到一定的螢光訊號(閾值)時所需的迴圈次數:

ct 值( cycle threshold );通過將已知濃度標準品的 ct 值與其濃度的對數繪製標準曲線,就可以準確定量樣品的濃度。

螢光定量pcr中,起始拷貝數是什麼?怎麼來的?

7樓:南京金益柏生物科技****

這個指的就是樣本中原有目標dna的數量。

在另外的一組管子中,加入已知拷貝數的dna同時擴增,每個管子中加入的數量是不同的,但是從最小數目到最大數目的這個範圍涵蓋了樣本中dna拷貝數。

pcr反應完成後,把已知拷貝數dna的量和pcr螢光ct值製成標準曲線,再把待測樣本的ct值和該標準曲線比對,就可以得到樣本中的起始拷貝數了。

螢光絕對定量中標準品指的是什麼,如何獲取

8樓:網友

標準品一般情況下就是一直濃度的樣品,不管是dna也好,cdna也好。一般就專是整個實驗室在做螢光屬定量時候都會使用這個樣品。不過,要求不是很高,特別是在在相對定量的時候。

在絕對定量是資料分析也有不同,畢竟還有標準曲線可以利用。

9樓:網友

標準品指的是已知拷貝數的核酸,簡單點說就是已知量的dna。

獲取方法是通過一些儀器及方法測得dna含量,換算成拷貝數,再進行梯度稀釋,即可得到標準品。

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