1樓：匿名使用者
博凌科為-為你解bai答：
du1．引物設計不夠優化zhi。應避免引物二dao聚體和髮夾結構的出現版。2.
引物濃度不佳。適當權降低引物的濃度，並注意上下游引物的濃度配比。3.
鎂離子濃度過高。適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。4.
模板有基因組的汙染。rna提取過程中避免dna的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。
2樓：匿名使用者
最主要的原因：
1.有非特異性產物
2. 有引物2聚體。
建議你重新設計引物。而且目前sybr green的方法已經逐漸被淘汰了，最好改用probe-primer 的方法來做。
熒光定量pcr溶解曲線為什麼會有一個急劇的上升連著急劇下降，形成一個峰。
3樓：匿名使用者
隨著溫度升高，當溫度達到tm值時候，dna就會變性分成單鏈的，此時熒光染料不內能結合nda所以檢測
容的熒光型號越來越弱。
你說的出現的峰是熒光性號對溫度求導後得到的曲線圖，出現峰是因為在接近tm值的位置熒光性號下降的斜率很快導致在對溫度求導後出現峰。
出現單峰說明沒有非特異性的結合和引物二聚體的產生。
4樓：匿名使用者
去看數學公式，反正我是不懂數學的
q-pcr熔解曲線峰的問題
5樓：匿名使用者
這這塊不平很正常啊，這個已經是經過計算畫出了的，你可以看看溶解曲線原始的資料圖，
這是溶解曲線的原始資料，如果你的產物tm比較適中的話，對數畫出來的峰你圈出來的位置就相對比較平，如果tm較低，就是你出現的那種斜的，這跟你的目標產物的tm有關，你給的兩個圖裡兩種樣品的tm明顯不同，第一個圖的只有82度左右，第二個圖有87度左右呢，你看引物好壞，主要還是看同一個引物的峰有幾個，像你第一個圖裡的引物都還可以啊，只有一個峰
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
6樓：匿名使用者
這個用於syber green實時pcr。而使用探針的不需要。
因為syber green是非特異性結合，所以如果有非特異性的序列被擴增，也會同樣產生訊號。在設計引物的時候，可以計算出被擴增序列的tm。pcr反應完成以後，開始進行解離曲線的測量。
一般是對反應產物逐步加溫，每增加一度，測訊號一次。pcr產物會在溫度達到tm時發生解離，熒光訊號會一下子消失、如果把溫度和熒光訊號的變化做一個圖，就會看到一開始，熒光訊號沒有變化，是一個平直的線。達到tm附近是，會有一個比較銳利的峰，說明訊號的變化很大，繼續加熱超過tm，這是雙鏈都開啟了。
所以訊號也不會再有變化，所以又是平直的線。
如果產物都是特異性的，就是我上面說的那樣。如果有非特異性產物，就會出現不在tm就出現峰值，或者有矮而胖的峰值等等異常情況出現，這樣，那個管子的樣本就不能用了。
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
7樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
8樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
實時熒光定量pcr擴增actin溶解曲線怎麼兩個峰
9樓：匿名使用者
兩個峰長什麼樣？是挨在一起的還是離的很遠的？縱座標最高峰是多少？是同一個峰出現一個小缺口的樣子嗎？如果可以請將原圖傳上
熒光定量pcr 溶解曲線出現雜峰，不知是引物問題還是什麼
10樓：南京金益柏生物科技****
用來做測試的cdna濃度應該比較高，而正式進行定量的模板濃度應該是有高有低吧，低濃度下出現非特異性溶解峰比較正常
如何計算熒光定量pcr標準曲線,怎麼判斷實時熒光定量PCR標準曲線是否準確
標曲中y軸一般是標準品或者未知樣品的ct值,x軸一般是標準品的初始量值,或者初始量值的對數。怎麼判斷實時熒光定量pcr標準曲線是否準確 看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度 我要用ct法做熒光定量pcr,請問需要做標準曲線嗎 最好是做標準曲線,要看看擴增效率的.調cdna就還了 怎麼判斷實時熒光...
熒光定量PCR標準曲線的製作是不是可以軟體自動生成的急謝謝
是的啊！但是你要在一起上標註好哪個是標樣以及重複，他就自動生成了 近幾年配的rt pcr的軟體都可以自動生成，07年前的最好自己用excel處理，那時候的軟體比較笨些。把資料用excel生產唄 abi7300熒光定量pcr結束後，可以用軟體自動生成標準曲線嗎？可以的話怎麼會呢？要具體流程。急！20 ...
誰能具體解釋一下熒光定量PCR中溶解曲線的意思以及作用
用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標...