細胞轉染補料液放多了怎麼辦

1樓：邋遢大王

細胞轉染補料液放多瞭解決方法：

1.如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種於培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，最好在轉染前4h換一次新鮮培養液。

2.用於轉染的質粒dna必須無蛋白質，無rna和其他化學物質的汙染，od260/280比值應在以上。

3.有血清時的轉染：

1）在開始準備dna和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響複合物的形成。其實，只要在dna-陽離子脂質體複合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。

2）陽離子脂質體和dna的最佳量在使用血清時會有所不同，因此在轉染培養基中加入血清時需要對條櫻巖件進行優化。

3）大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。對於對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用opti-mem培養基，一種營養豐富的無血清培養基。

4.培養基中的抗生素。

抗生素是影響轉染的培養基新增物。這些抗生素一般對於真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率降低。

所以，在轉染培養基中不能使用抗彎頌禪生素。

對於穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青黴素和鏈黴素，因為這些抗生素是geneticin選擇性抗生素（穩定轉染最常用的抗性篩選試劑）的競爭性抑制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的抗生素量。

5.設定陽性對照和陰性對照。

6.一般在轉染24-48h，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，24-48h後即可進行靶基因表達的檢測實驗。

7.如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標誌選用埋塵相應的藥物，常用的真核表達基因載體的標誌物有潮黴素和新黴素等。

2樓：網友

1、pbs洗2遍散困後，細胞刮刮下後離心（沒有消化，這衝中念樣可以嗎？）

2、去上清培罩，每管加入了加了188微公升的裂解液和12微公升的pmsf（是不是太多了？）

3、離心後，吸取140微公升上清到新ep管中。

4、加入5×sds上樣緩衝和dtt（這一步的我的比例應該是多少？上清：sds:dtt=7：2：1）