在提取RNA時,為什麼不是A260 A280越高越好? 5

2025-07-23 13:55:09 字數 3019 閱讀 9892

在提取rna時,為什麼不是a260/a280越高越好?

1樓:法師藥材店

這和核酸的結構有關係,純淨而完整的rna在a260和a280以及a230的吸收峰的比值是一定的,也就是說這個接近乙個固定值,並不受到外界條件的影響。只有當有雜質存在的時候,才會導致這比值發生變化。如蛋白質會在a280有強烈的吸收值,這樣會導致a280的值上公升,這樣a260/a280就會下降了。

同樣多糖會使a230的值公升高,所以比值也會下降。一般對於dna,純淨的時候比值是,而對於rna則是接近如果超過這個值,那麼最有可能的就是核酸降解了,因為寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比長鏈核苷酸要大,所以會使比值上公升。

提取rna測濃度時 a260/a280 大於3是為什麼

2樓:浪跡天涯的流星

1、提取rna測濃度時 a260/a280 大於3的原因可能是降解。

2、一般對於dna,純淨的時候比值是,而對於rna則是接近。如果超過這個值,那麼最有可能的就是核酸降解了,因為寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比長鏈核苷酸要大,所以會使比值上公升。

3樓:網友

建議去看一下分子生物學或者生物化學裡的dna增色效應有關的內容哦~~~

這其實是基礎知識。好好理解一下關於使用吸光度來計量核苷酸濃度的原理吧。

無論是dna,還是rna測值,原理都是一樣的,可以通用。

4樓:網友

可能是降解了。

也可能是之前晾乾的不夠充。

再提一次唄。

提rna a260/a280低是否與rna含量低有關

5樓:清晨在雲端

rna一般指核糖核酸。

核糖核酸(縮寫為rna,即ribonucleic acid),存在於生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳資訊載體。rna由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。乙個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和鹼基構成。

rna的鹼基主要有4種,即a腺嘌呤、g鳥嘌呤、c胞嘧啶、u尿嘧啶,其中,u(尿嘧啶)取代了dna中的t。

rna的濃度和a260/a280的比值是什麼關係

6樓:聽風

一般來說od260代表核酸的吸光度,od280代表蛋白質的吸光度。 a260/a280與od260/od280的意思是一樣的。a代表吸光值,而od是光密度值,二者含義一樣。

蛋白中trp、tyr、phe的吸光度為280nm,所以280nm常用來表示蛋白質吸光度;而260nm為dna的吸光度。

理論上,純的rna情況下:od260/od280的值為2,純的dna情況下:od260/od280的值為。

od260反映的是溶液中核酸的濃度,od280反映的是溶液中蛋白質或者氨基酸的濃度。樣品中如果含有蛋白質及苯酚,a260/a280比值會明顯下降。對於純的樣品只要讀出260 nm 的a值即可以算出含量。

通常以a值為1相當於50微克/ml 雙螺旋dna,或者40微克/ml 單鏈dna(rna),或者20微克/ml 寡核苷酸計算。

od260/od280= rna居多,純度已經很高了。

純dna:od260/od280≈>,表明有rna汙染;<,表明有蛋白質、酚等汙染)

純rna:

7樓:網友

a260nm

是核酸最高吸收峰的吸收波長,最佳測量值的範圍為至。如果不在此範圍,稀釋或濃縮樣品,使之在此範圍內;如果吸光度小於,檢查是否存在操作因素(如移液不準確,樣品內有懸浮物等)影響。dna樣品的a260 吸光度值是否》。

請注意,這個值跟儀器無關,核酸的吸光度必需大於,其值才有效和可靠,因為樣品中的雜質和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收,其值<。

a 吸光值。

i0 入射光強度。

i 投射光強度。

c 吸光物質的摩爾濃度(mol/l)

d 光通過的液層厚度(cm)

摩爾吸光係數(lmol-1cm-1)

a280nm

是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長,比值可進行核酸樣品純度評估:純dna的a260/a280比值為,純rna為。如果比值低,表示受到蛋白(芳香族)或酚類物質的汙染,需要純化樣品。

比值=相當於50%蛋白質/dna溶液。

a260/a280

是核酸純度的指示值,純度好的dna,在 下其比值應該在 或,a260 / a280的比值, 用於評估樣品的純度, 因為蛋白的吸收峰是280 nm。 純淨的樣品比值大於或者。如果比值低於 或者,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。

提rna的a260/a280為1.7左右,是否可用於螢光定量

8樓:桐華小智

1全部低質量的rna做反轉錄是沒有問題的,問題是做完反轉錄後你要做什麼。樣本的質量低,說明有汙染或者降解了,接著做其他的定量試驗,出來的結果就不可信了。

大神們,求助rna提取260/230低的問題

9樓:北京索萊寶科技****

260/230比值偏小,是有鹽汙染,解決的辦法是:

在乙醇洗脫步驟時:

乙醇,4℃,7500g/min,離心5min;

2、倒掉乙醇,再加入75%乙醇,條件同上,做第二次洗脫(注意,這次ep管在離心機。

裡的擺放方向與第一次相反,以便能更全面的洗脫);

3、再次掉轉ep管在離心機中的方向(不再加入乙醇),7500g/min,4℃,離心3min

後,用200μl的槍小心吸去乙醇(注意不要吸到管底的rna),然後開蓋晾乾乙醇即。

可。這樣做後,比只用乙醇洗一次的效果要好很多,我們所提rna用nanodrop測得260/230

值均在左右。

注意倒掉乙醇後再離心一次,把沾在管壁的乙醇離下來。

提取的c級rna,od 260/280的比值均大於2,做轉錄組測序時有影響嗎

10樓:匿名使用者

提取的好壞關鍵看膠圖28s18s的比例。

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