1樓:網友
與醋酸纖好粗段維薄膜電泳比較,聚丙烯醯胺的缺點如下:在操作過程中較其他電泳方法為複雜,目前一般的凳液臨床檢驗室使用尚少。膜片吸水不均勻,有白斑點或條紋,這提示膜片厚薄不勻,應捨去不用,以免造成電泳後區帶扭曲,界線不友譽清,背景脫色困難,結果難以重複。
2樓:鳳凰棲鳳翔鳳凰
醋酸纖維素薄膜的預處理。
市售醋酸纖維素薄膜均為幹膜片,薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關鍵之一。將幹膜片漂浮於電極緩衝液表面,其目的是選擇膜片厚薄及均勻度,如漂浮15s—30s時,膜片吸水不均勻,則有白斑點或條紋,這提示膜片厚薄不勻,應捨去不用,以免造成電泳後區帶扭曲,界線不清,背景脫色困難,結果難以重複。由於醋信御酸纖維薄膜親水性比紙小,浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩衝液,並使其恢復到原來多孔的網狀結構。
最好是讓漂浮於緩衝液的薄膜吸滿緩衝液後自然下沉,這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著走。點樣時,應將膜片表面多餘的緩衝液用濾紙吸去,以免緩衝液太多引起樣品擴散。但也不能吸得太乾,太乾則樣品不易進入薄膜的網孔內,而造成電泳起始點參差不齊,影響分離效果。
吸水量以不幹不溼為宜。為防止指紋感染,取膜時,應戴指套或用鑷子。
2、緩衝液的選擇。
醋酸纖維素薄膜電泳常選用巴比妥溶液,其濃度為。選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關。選擇時,先初步定下某一濃度,如電泳槽兩極之間的膜長度為8 cm—10cm,則需電壓25v/cm膜長,電流強度為膜寬。
當電泳達不到或超過這個值時,則應增加緩衝液濃度或進行稀釋。緩衝液濃度過低,則區帶泳動速度快,並由於擴散變寬;緩衝液濃滑嫌巖度過高,則區帶泳動速度慢,區帶分佈過於集中不易分辨。
3、加樣量。
加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關。作為一般原則,檢測方法越靈敏,加樣量則越少,對分離更有利。如加樣量過大,則電泳後區帶分離不清楚,甚至互相干擾,染色也較費時。
如電泳後用洗脫法定量時,每釐公尺加樣線上需加樣品約相當於5μg—1000μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時,每釐公尺加樣線加樣量不超過1μl,相當於60μg—80μg的蛋白質。但糖蛋白和脂蛋白電泳時,加樣量則應多些。
對每種樣品加樣量均應先作預實驗加以選擇。
點樣好壞是獲得理想圖者握譜的重要環節之一,以印章法加樣時,動作應輕、穩,用力不能太重,以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。
4、電量的選擇。
為何聚丙烯醯胺凝膠電泳解像度比醋酸纖維素薄膜凝膠電泳高?
3樓:帳號已登出
因為:聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質的優點在於對樣品的濃縮效應好,能在樣品分離前就將樣品濃縮成極薄的區帶,從而提高解像度。
若樣品濃度大,成分簡單時,用聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質也可以得到滿意的分離效果。同時,由於其具有濃縮效應、電荷效應和分子篩效應,聚丙烯醯胺凝膠電泳具有極高的解像度。
醋酸纖維素。
薄膜對蛋白質樣品吸附極少,無拖尾現象,染色後背景能完全脫色,各種蛋白質染色帶分離清晰,因而提高了測定的精確性。
特點:1)醋酸纖維薄膜對蛋白質樣品吸附極少,無「拖尾」現象,染色後背景能完全脫色,各種蛋白質染色帶分離清晰,因而提高了測定的精確性。
2)快速省時。由於醋酸纖維薄膜親水性。
較濾紙小,薄膜中所容納的緩衝液。
也較少,電滲作用小,電泳時大部分電流是由樣品傳導的,所以分離速度快,電泳時間短,一般電泳45—60min即可,加上染色,脫色,整個電泳完成僅需90min左右。
3)靈敏度高,樣品用量少。 血清蛋白僅需2μl血清,甚至加樣體積少至,僅含5μg蛋白樣品也可得到清晰的分離帶。
以上內容參考:百科-醋酸纖維素薄膜電泳。
聚丙烯醯胺凝膠電泳與瓊脂糖凝膠電泳的區別
4樓:信必鑫服務平臺
聚丙烯醯胺凝膠電泳與瓊脂糖凝膠電泳的區別為:支援介質不同、用途不同、優勢不同。
一、支援介質不同。
1、聚丙烯醯胺凝膠電泳:是以聚丙烯醯胺凝膠櫻猛作為支援介質脊明橋的一種常用電泳技術。
2、瓊脂糖凝膠電泳:槐好是用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。
二、用途不同。
1、聚丙烯醯胺凝膠電泳:用於分離蛋白質和寡核苷酸。
2、瓊脂糖凝膠電泳:用於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等。
三、優勢不同。
1、聚丙烯醯胺凝膠電泳:有較高的解像度。
2、瓊脂糖凝膠電泳:它製備容易,分離範圍廣。
百科——聚丙烯醯胺凝膠電泳。
百科——瓊脂糖凝膠電泳。
聚丙烯醯胺凝膠電泳是利用什麼原理製成的?
5樓:鈺瀟
過硫模虛吵酸銨就是引發劑,而temed可以催化過硫酸銨產生自由基,從而加速丙烯醯胺凝膠的聚合。
聚丙烯胺凝膠由單體丙烯醯腋甲叉雙丙烯醯胺聚合而成,催化聚合的常用方法有兩種: 化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(ap)為催化劑,以四甲基乙二胺(temed)為加速劑旦侍。
聚丙烯醯胺凝膠電泳簡稱page ,是以聚丙烯醯胺凝膠作為支援介質的一種常用電泳技術,用於分離蛋白質和寡核苷酸。
總結比較醋酸纖維薄膜電泳,瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯醯胺凝膠電泳的分
6樓:匿名使用者
dna電泳一般使用的都是瓊脂糖凝膠電泳,電泳的驅動力靠dna骨架本身的負電荷。 蛋白質電泳(一般指sds-page)一般使用的都是聚丙烯醯胺凝膠電泳,電泳的驅動力靠與蛋白質結合的sds上所攜帶的負電荷。 所以相同點就是樣品都是帶負電荷的,從負極向正極移動,移動的距離都和樣品的分子量有關。
而且這兩個電泳體系可以互相交換使用。進行大分子蛋白質電泳時,可以考慮換用瓊脂糖凝膠,因為該體系孔徑大。相反,如果需要精確到各位數鹼基的dna電泳也可以使用聚丙烯醯胺凝膠系統,因為使用該系統可以將相差乙個鹼基的兩條dna鏈分開。
不同點首先是樣品不同。這個就不用多說了。其次是結果的觀察方法不同。
dna電泳普遍使用eb做染料,在紫外燈下觀察;而蛋白電泳使用的考馬斯亮藍染色,還需要經過脫色步驟,不過觀察起來比較簡單。還有就是膠體系的差別,dna電泳通常是一膠跑到底,而蛋白質電泳則會有分離膠和濃縮膠之區別。 電泳中樣品移動的本質確實是樣品所攜帶的電荷。
但是,區分這些條帶直接可以用分子量而無需使用電荷數,是因為這些樣品的電荷/分子量比都是恆定的了。以dna分子為例,它在電泳中的移動是靠其骨架中磷酸所攜帶的負電荷來實現的,而這個磷酸分子又是每乙個核苷酸中都有的,所以dna分子所攜帶的負電荷數是由其核苷酸總數決定的。而且,dna分子中核苷酸的組成動輒成百上千,在如此大的分子量面前,討論單個核苷酸之間分子量的差別就顯得毫無意義。
這樣,dna分子中負電荷的量就可以用dna的分子量來代替,反過來,dna的分子量也就可以用dna分子所攜帶的電荷來代替(一句話,dna分子的電荷/分子量比是恆定的). 這在蛋白電泳中(特別是sds-page中)是一樣的。在sds-page中,sds將蛋白質變性成直線分子並緊密包裹於其上,使得其所攜帶的電荷與蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸電泳一樣了。
7樓:
紙電泳,醋酸纖維素薄膜電泳,澱粉凝膠電泳,瓊脂(糖)凝膠電泳及聚丙烯醯胺凝膠電泳等。
8樓:匿名使用者
不一定 大多是均一物質,若電泳效果不好,出現拖尾現象,就不是均一物質。
比較醋酸纖維膜電泳與紙電泳的異同點
9樓:xiaobin在路上
醋酸纖維素薄膜電泳。
採用醋酸纖維薄膜作為支援物的電泳方法稱為醋酸纖維素薄膜電泳。醋酸纖維素是纖維素的羥基乙醯化所形成的纖維素醋酸酯,將它溶於有機溶劑(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)後,塗抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。
該膜具有均一的泡沫狀的結構,厚度約為120μm,有很強的通透性,對分子移動阻力很小。
醋酸纖維素薄膜電泳是近年來推廣的一種新技術,它具有微量、快速、簡便、分辨力高,對樣品無拖尾和吸附現象等優點。
至於紙電泳 我不太懂。
用醋酸纖維薄膜做電泳支援物有什麼優點
10樓:芥末留學
醋酸纖維素薄膜電泳的特點:醋酸纖維素薄膜是由醋酸纖維素加工製成的。醋酸纖維素薄膜作為是電泳支援體。它有以下優點:
電泳後區帶界限清晰;
通電時間較短(二十分鐘至一小時);
它對各種蛋白質(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎完全不吸附,因此無拖尾現象;
對染料也沒有吸附,因此不結合的染料能完全洗掉,無樣品處幾乎完全無色。它的電滲作用雖高但很均一,不影響樣品的分離效果,由於醋酸纖維素薄膜吸水量較低,因此必需在密閉的容器中進行電泳,並使用較低有電流避免蒸發。
11樓:美麗的傳說尼
以醋酸纖維薄膜為支援物,浸入的緩衝液後吸去多餘液體。將微量血清點於膜上,經電泳後,將薄膜置染色液中使蛋白質固定並染色,洗去多於染料。將膜條烘乾,再將其用透明液進行透明處理。
用光密度計或凝膠成像系統進行成分分析比較。
簡述血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳原理
呦,對於電泳嘛,就不得不提到膠體問題了,因為血紅蛋白屬於膠體,所以他的電泳就不難解釋了。言歸正傳,正是因為各個電離出的基團都帶電,所以在電場的驅使下向陰陽兩極運動。以醋bai酸纖維薄膜為支援du物,浸入ph8.6的緩衝液zhi後吸去多餘液體dao。將微量血清點於膜專上,經電泳後,將薄膜置屬染色液中使...
如何正確繪製血清醋酸纖維薄膜電泳圖譜
殊的功能。在各種疾病期間總血清蛋白濃度和各蛋白質組分的比例可發生變化,因此,血清蛋白質和各蛋白質組分的定量在臨床診斷和 上有很重的價值 1 血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳 實驗因而是 生物化學 學科實驗專案中最常開設的基本實驗專案之一,該實驗的開設有利於幫助學生更進一步瞭解血清蛋白質的基本組分及正常含量。...
怎樣區分醋酸纖維和聚丙烯?
醋酸纖維 又稱醋酸纖維素,即纖維素醋酸酯。醋酸纖維素以醋酸和纖維素為原料經酯化反應制得的人造纖維。結構式可表示為 cho oocch n。聚丙烯 分子結構為典型的主體規整結構,為結晶聚合物,其分子量為 萬。比重 克 立方厘公尺。成型收縮率 成型溫度 特點 度小,強度剛度,硬度耐熱性均優於低壓聚乙烯,可...