1樓：一葉鵺秋
從下圖中可以看出，由試吧**提供的oneshine sybrgreen premix較之於tak市售的同類產品，oneshine sybrgreen premix的ct值出現更早，指數期上揚更快，平臺期訊號值更高，重複性更好，熔解曲線低溫區平直、轉折明顯，熔解峰尖銳、單一；產生熔解溫度差異的原因是oneshine sybrgreen premix新增了一種特殊的酶保護劑，這種酶保護劑可以提公升產品的凍融次數，有利於多次使用。
2樓：哀運恆
如果已知基因序列，先提取有該基因的組織的總rna，反轉錄成cdna，然後設計引物，將目的基因pcr擴增出來，割膠純化得到目的基因。可以和t載體連線後，送去測序，看序列是否正確。
得到目的基因後，看具體的受體是什麼，在選用具體的方法。如果是酵母，可以構建載體，電轉化到酵母細胞中。
最近在進行micro-rna實驗，在進行反轉錄和螢光pcr及引物設計有沒有好產品？我急需進行驗證實驗
3樓：網友
檢測microrna，如果abi的檢測方法有點貴的話，可以查閱國產的很多公司的方法，檢測的結果都挺好的，比如上海吉碼公司，廣州的銳博公司。
4樓：宗生萱澤
我之前在銳博設計過microrna的反轉及pcr引物，但是他們公司不提供序列。效果還不錯！我也有問題想問下你！
在做microrna的定量時，內參基因你要選什麼？你做的是什麼生物？內參和microrna反轉是在乙個管子裡進行，還是分開進行。
5樓：匿名使用者
這個問題太難了 不懂事什麼意思。
pcr引物有物種限制嗎?如由小鼠細胞提取rna,設計引物進行擴增,引物有種屬要求嗎?引物必須是小鼠種屬嗎?
6樓：網友
回答都很逗 引物哪有什麼種屬 引物是根據目的基因設計出來的啊 目的基因才有種屬的區別 就是你從網上搜乙個基因在人的細胞裡面擴增用的引物 未必能直接拿來從老鼠的細胞裡面擴增 不是因為什麼引物種屬啥的 只是因為同乙個基因在人和老鼠裡面序列可能是不一樣的。
7樓：網友
你提取rna是要做mrna差別顯示或cdna文庫嗎？
mrna差別顯示的3』端引物是oligo（dt）加1個或2個分類鹼基，5』端是10bp的隨即引物。
cdna文庫中的第一步rt-pcr反轉錄合成cdna第一鏈，用的引物是oligo（dt），第二鏈的合成可以加入rnase h進行合成。
8樓：湖泊小貓
如果是想從中擴增出某個特異基因的rna，我想還是有要求的，需要根據文獻涉及幾對引物進行擴增，一般來說種屬間的序列不會差別太大，但特殊的基因除外。還是以文獻為參考。
9樓：遠山的原故鄉
理論上沒有。rna翻譯或反轉錄只要遵守鹼基互補配對原則就好。
有關單細胞提取rna，看大多都說直接裂解細胞後反轉錄，然後pcr。這樣pcr時會有dna汙染嗎？
10樓：網友
這要看你引物設計如何了，跨內含子與否。。？
如果引物設計的好，dna汙染對反轉錄是沒有任何影響的。。
不過還是建議你用dna酶消化一下。。
北京華越洋的rna提取試劑盒，在rna提取過程中清楚了dna汙染，所以得到的rna沒有任何dna汙染，可滿足苛刻的螢光定量pcr對dna無殘留的要求。。
北京華越洋生物。。外源rna酶清除劑，代替致癌的depc，。。rna提取必備！
11樓：月令樓
用polya做反轉錄引物，不會有基因組dna汙染。
12樓：生物行業那些事
還是建議你使用專門的試劑盒，具有裂解細胞並去除基因組功能的，比如。
fastline cell cdna kit（tiangen），可以直接提取貼壁細胞，懸浮細胞或者凍存細胞，裂解後有相應的去除基因組步驟，用的是目前反轉效率最高的（能到90%）的quant家族反轉錄酶。對於不同的細胞起始量還有詳細的操作說明。可以從單細胞到100000個細胞都能做。
13樓：把花香
逆轉錄是用dna做模板，生成rna，所以pcr里加的原料都是合成rna的核糖核酸，不會汙染。
為什麼用rna為模板,以基因組設計引物可以pcr出產物
14樓：網友
如果你沒有反轉錄就能pcr出來，只能說明：1.你的rna有dna汙染，如果這樣，建議加一點dnasei降解dna，再加edta中止酶的反應；2，有可能是你實驗過程中的某種溶液汙染，可以換另外一批實驗用試劑試一下。
15樓：網友
同意樓上的觀點。
如果不是用反轉錄酶做pcr的話，那就是你的rna裡面有汙染。
改正！！：反轉錄酶不耐熱的，做不了pcr。
16樓：網友
cloning
這種轉殖方式利用的是，一般pcr所用的dna聚合酶具有在pcr產物3『端新增乙個鹼基a的特性，也就是說，實際上常規pcr的產物並不是平末端的，而是有乙個突出的a鹼基，為了對pcr產物進行高效的轉殖，人們開發出了一種專門用於pcr產物轉殖的載體--t載體，t載體是乙個線性化的載體，其末端是乙個突出的t，正好與pcr產物上突出的a配對，所謂的t/a轉殖就是將帶有突出a尾巴的pcr產物與t載體連線，然後轉化宿主菌的轉殖，這種轉殖效率非常高，很容易成功，應用也非常廣泛，常用於下游轉殖操作前的pcr產物測序鑑定和方便對pcr產物進行酶切處理。
stick end cloning
翻譯過來就是限制性粘末端轉殖，就是在pcr擴增引物的設計過程中，在引物中新增特定的酶切位點，這樣經過pcr擴增後，得到的片段兩端就帶有需要的限制性酶切位點，對pcr產物進行酶切後，就可以直接與目的載體進行連線，實現轉殖。這種方式省略了t/a轉殖，一步到位，但是由於酶切位點位於片段末端，常常導致酶切效率較低，需要較長時間，必須設計好保護鹼基。
cloning
所謂的平末端轉殖，就是用klenow片段將pcr產物末端突出的a鹼基補平，然後與帶有平末端的載體進行平末端轉殖，平末端轉殖效率很低，這種方式一般應用的很少，只是當pcr擴增所用的酶是高保真聚合酶如pfu時，因為這種酶不會再pcr產物末端新增額外的鹼基，pcr產物為平末端的，這時可能會用到平末端轉殖，其實對這種pcr產物進行乙個加尾處理，再進行t/a轉殖，可能更加簡單一些，呵呵。
rt-pcr的原理是什麼？有何用途？
17樓：愛做作業的學生
原理是：提取組織或細胞中的總rna，以其中的mrna作為模板，採用oligo（dt）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cdna。再以cdna為模板進行pcr擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。
該技術主要用於：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cdna探針、構建rna高效轉錄系統。
rt- pcr（reverse transcription-polymerase chain reaction）即逆轉錄pcr，是將rna的反轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增（pcr）相結合的技術。
首先經反轉錄酶的作用從rna合成 cdna，再以cdna為模板，擴增合成目的片段。rt-pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平，細胞中rna病毒的含量和直接轉殖特定基因的cdna序列。
作為模板的rna可以是總rna、mrna或體外轉錄的rna產物。無論使用何種rna，關鍵是確保rna中無rna酶和基因組 dna的汙染。
用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、oligo dt 及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮卡結構的真核細胞mrna，三種都可。
18樓：網友
pcr全稱多聚酶鏈式反應，原理是dna的體外擴增。
具體來說：在ep管里加入dna、合成原料（dntp、引物）、耐熱的dna聚合酶（taq）後，放入pcr儀，pcr儀會利用公升溫使dna變性，在聚合酶的作用下使單鏈複製成雙鏈，進而達到基因複製的目的。
用途：1、核酸的基礎研究：基因組轉殖。
2、不對稱pcr製備單鏈dna用於dna測序3、反向pcr測定未知dna區域。
4、反轉錄pcr（rt-pcr）用於檢測細胞中基因表達水平、rna病毒量以及直接轉殖特定基因的cdna
5、螢光定量pcr用於對pcr產物即時監控6、cdna末端快速擴增技術。
7、檢測基因的表達。
8、醫學應用：檢測細菌、病毒類疾病；診斷遺傳疾病；診斷腫瘤；應用於法醫物證學。
19樓：一零啞劇
螢光定量pcr目的：在pcr反應中，無論是定性還是定量分析，分析的都是pcr的終產物。但是有時候想知道的卻是未經pcr放大之前的起始模板量，rt-pcr應用而生。
提取rna的血液怎樣儲存，提取RNA的血液怎樣儲存
在用血液標本進行基因表達研究時，需要及時把新鮮血液中有核細胞的rna提取出來。全血還不能直接放到 80 儲存，即使在 80 儲存，全血中的rna也容易發生降解。傳統的提取新鮮全血rna方法是把先把有核細胞從全血中分離出來，需要加白細胞分離液 離心等步驟，比較繁瑣，在臨床醫院往往難以實施。作為rna提...
如何點評RNA跑膠圖，提取的總RNA跑膠從大到小有幾條帶
提取完了用分光光度計能夠測定濃度，跑膠主要看兩個條帶 18s,28s 都在，彌散多不多,從而判斷rna分子完整性。核糖體rna ribosomal rna，rrna 是組成核糖體的主要成分。核糖體是合成蛋白質的工廠。在大腸桿菌中，rrna量佔細胞總rna量的75 85 而trna佔15 mrna僅佔...
什麼組織中RNA含量高且易提取
rtpcr時提取rna的濃度和純度有什麼要求 rtpcr時提取rna的濃度和純度要求 濃度ng ul以上足夠了，如果用的是組織提取，濃度一般很高，可以達到幾百甚至幾千。如果你用的是病毒 少量細胞，濃度低一些也沒有關係。純度需要用儀器測一下。 理論值應該有以上， 值以上基本合格。rt pcr 最重要的...