如何純化pcr產物或粗提的dna

2025-03-17 17:05:10 字數 1600 閱讀 6915

1樓:聽風

dna純化的尺悔步驟是:

倍100%的酒精冰箱中先預冷,降溫後再加入dna中;

2.低溫,冰中反應5min至更長時間;

3.低陵前正溫,離心;

4.加70%乙醇。

清洗兩遍;5.加悔螞te溶解dna.

2樓:橫眉冷豎大拇指

1) 在pcr反應液中加入3倍體積的buffer pcr-a,若需加入的buffer pcr-a不足100μl,則加入100μl。

2) 將dna-prep tube置於2-ml microfuge tube中,將步驟⑴中的混合液移入dna-prep tube中,5500rpm離心1min。

3) 棄濾液,將dna-prep tube置回到原2-ml microfuge tube中,加入500μl buffer w1,5500rpm離心1min。

4) 棄濾液,將dna-prep tube置回到原2-ml microfuge tube 中,加入700μl 已加無水乙醇的buffer w2,5500rpm離心1min,以同樣的方薯咐迅法再數此用700μl已加無水乙醇的bufferw2洗滌一次。

5) 棄濾液,將dna-prep tube置回到原2-ml microfuge tube中,14000rpm離心1min。

6) 連濾液一併棄掉收集管,將dna-prep tube 置於一新的 離心管中,在silica 膜**加入25-30μl eluent或去離子水(65℃預熱)。

7) 室溫靜置2min,14000rpm離心1min洗脫dna。

8) 取5μl樣品,1%瓊脂糖凝簡散膠電泳檢測純化結果。

3樓:無腳鳥

你是指漏運跑膠、割膠然後用試劑盒純化**嗎?

如果是的話,有以下幾個方法可能可以提高**率。

1凝膠要充分溶解。2加elution buffer溶解dna時少加點。3用elution buffer洗脫時可以把管子裡的溶液吸回來,重複一次。

4溶解時延長室溫溶解時間。5pcr迴圈可以多並隱几次。6可以把兩管**離心後,合併返蔽梁成一管吸附柱**。

樣品dna經pcr技術(聚合酶鏈式反應)擴增,可以轉殖出大量dna分子.其原理是利用dna半保留複製,在試管中

4樓:澀僇珙

(1)分析題圖可知,a表示dna分子變性,即高溫使dna分子解旋形成單鏈dna分子.

2)由題意知,某樣品dna中共含有3000個鹼基對,鹼基數量滿足:(a+t):(g+c)=1

2,因此樣品中a+t的鹼基數為3000×2×1

2000個,a=t=1000個,因此要得到1000個拷貝(即與樣本相同的dna),需要遊離的腺嘌呤核苷酸數目是1000×1000-1000=999000個.

3)①限制性內切酶能將dna樣品切成特定的小片段,體現了酶的作用具有專一性.

如果是異卵雙生的雙胞胎,其遺傳物質不一定相同,因此雙胞胎或多胞胎的「基因身份證明」(dna指紋)不一定完全相同.

分析題圖2可知,小孩的一條dna指紋與母親相同,另一條與b相同,因此b是小孩的生物學父親.

故答案為:(1)dna解旋。

3)①a ②不一定 如果是異卵雙生的雙胞胎,其遺傳物質不一定相同 ③b

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