請教如何用培養的細胞做PCR

1樓：匿名使用者

細胞培養物汙染往往是細胞培養實驗室最常遇到的問題,有時會帶來十分嚴重的後果.細胞培養汙染物主要分為兩類,一類是化學汙染物,例如：培養基、血清和水中的雜質、內毒素、增塑劑和去汙劑,另一類是生物汙染物,例如：

細菌、黴菌、酵母、病毒、支原體以及其他細胞系的交叉汙染.儘管無法徹底消除汙染,但是可以通過充分了解汙染源以及採用良好的無菌技術,降低汙染髮生的頻率和嚴重程度.　　細菌是一大類廣泛存在的單細胞微生物.

細菌直徑一般為幾個微米,外形多樣,例如：球狀、桿狀和螺旋狀.細菌由於分佈廣泛、生長迅速以及體積大小的特點,與酵母和黴菌一起構成了細胞培養中最常遇到的生汙染物.

培養物被細菌汙染後,幾天內即可通過簡單的肉眼觀察發現；被感染的培養物通常呈雲霧狀 (即：渾濁狀),有時表面會覆蓋一層薄膜.另外,經常還會發現培養基的 ph 值突然降低.

在低倍顯微鏡下可見,細菌為細胞之間移動的微小顆粒,在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出各個細菌的形狀.　　酵母是真菌界的一種單細胞真核微生物,大小從數微米 (多見) 到 40 微米 (罕見) 不等.與細菌汙染類似,培養物被酵母汙染後也會變得渾濁,特別是進入汙染後期時.

培養物被酵母汙染後 ph 值變化極小,汙染嚴重時 ph 值才會升高.在顯微鏡下,酵母呈單個卵圓形或球形顆粒,有些會芽生出較小的顆粒.黴菌是真菌界的一種真核微生物,以被稱為菌絲的多細胞絲狀體形式生長.

這些多細胞絲狀體構成的交聯網路含有遺傳性相同的細胞核,被稱為集落或者菌絲體.與酵母汙染類似,黴菌汙染初期培養物 ph 值會維持穩定,汙染加重後 ph 值會迅速升高,導致培養物渾濁.在顯微鏡下,菌絲體通常呈細束狀纖維,有時呈較為密集的孢子團塊.

許多種黴菌的孢子在休眠期均可耐受極端嚴峻、不利的環境,當其遇到合適的生長條件時才會被活化.

2樓：龍鳳油洺月

用試劑盒提取dna後做pcr吧

做實時pcr需要多少細胞

3樓：匿名使用者

如果你想做熒光定量pcr的根據實驗思路來說應該需要一下試劑和儀器

1.模板提取（一般為rna）：trizol、氯仿、異丙醇、無水乙醇、depc處理水

2.模板濃度測定：分光光度計或nanodrop

3.逆轉錄：逆轉錄試劑盒（或者一步法試劑盒），這一步可以用普通pcr做，也可以用水域做。

4.熒光定量pcr試劑：通常有用sybr green mix做的，但是這裡建議你用evagreen做，靈敏度和平行性都要好於sybr green，並且如果你那是abi或者stratagene的pcr如果用sybr green還需要加一步rox很麻煩。

5.其他：除了以上的那些還需要離心管、pcr管或板（axygen反應比較好）、移液槍等，暫時就想到這麼多。