雙螢光素酶報告基因一定要在工具細胞上做嗎

雙螢光素酶報告基因實驗可以用哪些細胞做

1樓：網友

動物的一般，常規來說樹突壯細胞，巨噬細胞都可以的。

緊急求助，關於雙螢光素酶報告基因實驗中細胞裂解問題

2樓：凡人歌非人

1.兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色螢光蛋白，很直觀，能夠直接檢到螢光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他並行的實驗安排影響很小。

螢光素酶報告基因使用起來比gfp多乙個步驟，因為螢光素酶是個酶，不發螢光，發螢光的是它的底物，螢光素。螢光素在細胞裡（要說螢火蟲細胞我就不知道了哦）是沒有的。所以檢測螢光素酶的通常步驟是裂解細胞，釋放螢光素酶，與螢光素及其他所需化學物質混合，才得到螢光。

現在雖然也有活細胞內檢測螢光素酶的手段，但要將螢光素送入活細胞，本身就已要對細胞進行相當的干擾。所以一般來說螢光素酶實驗的同一批細胞不適合再做其他並行實驗。

2.兩者的結果含義不同。gfp如果說是定量檢測表達蛋白的話，這個定量只能夠指，表達的細胞是多少個，不表達的細胞是多少個。

gfp對於單個細胞來說，就有陽性和陰性兩種結果罷了。gfp不能夠定量地告訴你，這個/群細胞裡的表達量是多高還是多低。螢光素酶就能夠定量地得到表達量/表達水平的數值，但這個數值是相對於一群細胞來說，而不是對於單個細胞。

所以螢光素酶常常用來研究啟動子的功能與調控，因為啟動子對基因表達的調控可以是漸變的，而不是簡單的開和關兩種狀態。

我是新手培養hbe 細胞於24孔板做雙螢光素酶報告基因檢測，細胞總是往兩邊長，中間基本沒有細胞?

3樓：網友

種完細胞搖一搖。。。要不換一株可能細胞狀態不好。

4樓：網友

別的細胞沒有這兒狀況麼。

螢光素酶報告基因的技術流程是什麼？

5樓：網友

啟動子的**。

轉錄因子的**。

報告基因質粒的構建。

實驗方法及結果分析。

用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。

設計引物用pcr法從基因組dna中轉殖所需的靶啟動子片段，將此片段插入到螢光素酶報告基因質粒（pgl3-basic）中。

篩選陽性轉殖，測序。擴增轉殖並提純質粒備用。

擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒對照，提純備用。

培養293（或其它目的細胞），並接種於24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。

將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。

提取蛋白並用於螢光素酶檢測。

加入底物，測定螢光素酶的活性。

計算相對螢光強度，並與空載對照比較。