1樓:du知道君
成像的話一般螢光顯微鏡、雷射共聚焦顯微鏡;定量的話一般就是流式細胞儀吧。
螢光素酶實驗(luciferase assay)通常變化多少倍才算明顯?
2樓:小曉石頭心
dual-luciferase®reporter assay system e1910
dual-luciferase® reporter (dlr™) assay system (dual-luciferase® 雙螢光素酶報告基喚戚因檢測系統) 為雙報告基因檢測提供有效的手段。 在dlr™ 檢測中,螢火蟲(photinus pyralis ) 螢光素酶和海腎(renilla reniformis ) 螢光素酶的活性可在單個樣品中依次檢測。首先檢測螢火蟲螢光素酶,將螢光素酶檢測試劑ii(luciferase assay reagent ii, lar ii)加入樣品中,產生的光訊號至少持續1分鐘。
定量螢火蟲螢光強度後,再在同乙個樣品中加入stop & glo® 試劑,將上述反應終止,同時啟動海腎螢光素酶反應。使用帶有試劑自動注射器的發光檢測儀,可在4 秒內完成兩個檢測。在dlr™ 檢測系統中,兩個報告基和掘陵因產生的線性檢測的散橋靈敏度均可達埃摩爾級(<10-18),在實驗宿主細胞內均無內源活性。
而且,dlr™ 檢測的一體化模式既可快速定量檢測轉染細胞,也可用於快速定量檢測無細胞轉錄/ 翻譯反應體系中的兩個報告基因。
為了得到dual-luciferase® 試劑盒的最佳檢測結果,promega推薦使用針對該檢測過程進行過確證的發光檢測儀。這些發光檢測儀均帶有dlready ™ 標識。請參閱「通過dlready ™ 確證的發光檢測儀」頁面,來了解相應的儀器資訊。
pgl4 螢光素酶報告基因載體是針對dlr™ 檢測系統而設計。組成型表達的海腎螢光素酶載體可與任何實驗用螢火蟲螢光素酶載體聯合共轉染哺乳動物細胞。
雙螢光素酶報告基因系統promega 多少錢
3樓:叢嵐郝方方
只能先就標題的問題談談我的認識。後面的追問我瞭解得也不全面。
1.兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色螢光蛋白,很直觀,能夠直接檢到螢光,在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到,對細胞的生命活動和其他並行的實驗安排影響很小。
螢光素酶報告基因使用起來比gfp多乙個步驟,因為螢光素酶是個酶,不發螢光,發螢光的是它的底物,螢光素。螢光素在細胞裡(要說螢火蟲細胞我就不知道了哦)是沒有的。所以檢測螢光素酶的通常步驟是裂解細胞,釋放螢光素酶,與螢光素及其他所需化學物質混合,才得到螢光。
現在雖然也有活細胞內檢測螢光素酶的手段,但要將螢光素送入活細胞,本身就已要對細胞進行相當的干擾。所以一般來說螢光素酶實驗的同一批細胞不適合再做其他並行實驗。
2.兩者的結果含義不同。gfp如果說是定量檢測表達蛋白的話,這個定量只能夠指,表達的細胞是多少個,不表達的細胞是多少個。
gfp對於單個細胞來說,就有陽性和陰性兩種結果罷了。gfp不能夠定量地告訴你,這個/群細胞裡的表達量是多高還是多低。螢光素酶就能夠定量地得到表達量/表達水平的數值,但這個數值是相對於一群細胞來說,而不是對於單個細胞。
所以螢光素酶常常用來研究啟動子的功能與調控,因為啟動子對基因表達的調控可以是漸變的,而不是簡單的開和關兩種狀態。
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