1樓：匿名使用者
有兩個方面，一是載體本身酶切不充分，沒有完全切開；二是去磷酸化不充分。
連線到t載體上面後，做雙酶切，條帶不正確，目的片段變大是什麼原因
2樓：網友
為啥要連到t載體上做雙酶切 直接切不就得了 跑膠只是看個大概的大小啦 不準的 變大幾百都算正常 只要你測序沒問題就可以了。
在基因工程中，用雙酶切目的基因和質粒時怎麼保證目的基因和載體的定向連線？難道不會再出現其他連線嗎？
3樓：網友
同一種酶切的末端可以相連線在一起，如果質粒的左端和目的基因的左端用同一種酶切，二者的右端用另一種相同的酶切，那麼就可以實現定向連線了。
4樓：網友
不同的酶切獲得黏性末端不同，不同的黏性末端不能相連，如果直插入乙個片段那麼插入片段的方向是確定的。
5樓：劉佩姿
如果只以單酶切割。會使目地基因或質粒自我連線。形成環狀結構。但用雙酶的話就可以避免這個問題啦。
請大俠賜教：什麼時候用單酶切，什麼時候用雙酶切？
6樓：吉建本
連線第乙個載體的時候是t載體還是其他的，我認為第一次連應該是用於目的基因的擴增，畢竟pcr出來的目的基因量不是很足。第二次用雙酶切切下目的基因，同時切的第二個載體是用於構建載體用的，雙酶切後就將目的基因和用於構建的載體連線起來。
7樓：貓太郎
構建就是個過程嘛 最後能搞出那個質粒 不管你用什麼方法都無所謂啦 管他單切雙切的。
pcr產物沒有純化能夠直接進行雙酶切嗎？
8樓：晨光眠夏
不可以。
首先，採用的是質粒模板；
其次，擴增得到的非單一條帶，如果不純化直接酶切，那麼得到的將是帶有相應酶切位點的幾種片段，繼續試驗的話，菌落pcr鑑定時可能會出現幾種不同大小的條帶。
第三、pcr產物裡面緩衝液並不是合適的酶切緩衝液，會極大的影響酶切的效率。甚至於根本就切不開，即便是隔夜酶切也不可以。
我在做rnai載體構建，已連線了一端的目的基因，另一端的雙酶切可以用xho1和sac1嗎？
9樓：小蠻
你要問你同學或者師兄師姐要你們載體的圖譜，上面標有有哪些酶切位點。只要載體上有，目的基因上游，且方向正確就可以用~~~
10樓：一分流水
要看你載體上的多轉殖位點都有什麼，你連入的目的片段裡沒有這兩個位點就可以雙酶切，並且你連入的兩個片段要反向互補，酶切位點的順序看載體上啟動子在那邊，然後按順序加在片段上就可以了。
什麼情況下要使用雙酶切的方法？
11樓：惟鏞
很多實驗都會用到雙酶切，特別是載體構建，需要把載體切開兩個不同的末端時會根據序列的具體情況選擇雙酶切。請說明你是做什麼實驗？
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