1樓：源嬋杜玥
bca檢測的是所有蛋白的量。
你想要測定目的蛋白的量，最好用elisa檢測，這樣更容易些非要用western
blot來定量，需要一種軟體的。
然後marker來檢測的是分子量，不是濃度。
2樓：
簡而言之 分光度儀是不可以的 只能打質譜或者western標抗體
3樓：淡陽曦
做分子量大小鑑定 ，質譜就可以做精密分子量分析。page**分子量存在很大差異，再一方面，western blotting具有不可重複性，效果不好，我做過。希望幫到你。
4樓：匿名使用者
如果蛋白有純化標籤並且是過表達的話就比較容易判斷，一般純化過程中通過sds電泳不同組分確定目的蛋白。如果沒有純化標籤，一般是通過sds電泳或者雙向電泳和蛋白活性實驗(如果蛋白有生物活性，比如酶)，或者通過western blot來確定目的蛋白。如果再想精確的話，就是n端測序或者做肽譜。
5樓：匿名使用者
鑑定目的蛋白？看自身特點性質。最直接的，分子量，跑page看大小，還有極性，等電點，
如果有抗體，用抗體鑑定，做western等等，或者質譜，測序。
6樓：匿名使用者
做western blot或elisa
蛋白質提取問題
提取的蛋白質為什麼要煮一下
7樓：匿名使用者
滅活。滅活之後的來蛋白質，自一方面易於儲存，另一方面，有的蛋白質是毒性蛋白，煮一下，蛋白質失去活性，改變其原有的理化性質，失去了毒性。此外，蛋白質水煮變性後，分子結構鬆散，不能形成結晶，易被蛋白酶水解，巨集觀上說就是更易被人體吸收。
8樓：匿名使用者
水煮的目的是破壞蛋白質空間結構使其轉變為線性結構，從而達到根據分子量不同在膠中跑的速度也不同來進行分離
使蛋白酶滅活，對蛋白質同樣起到了保護作用
蛋白質提取方法比較
9樓：初芯_不變
1、超速離心法
此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處於不同密度梯度層內，達到彼此分離的目的。
2、選擇性沉澱法
其原理多根據各蛋白質理化特性的差異，採用各種沉澱劑或改變某些條件促使蛋白質抗原成分沉澱，從而達到純化的目的。常用的方法是鹽析沉澱法。
3、凝膠層析法
凝膠層析是利用分子篩作用對蛋白質進行分離。凝膠是具有三維空間多孔網狀結構的物質，經過適當的溶液平衡後，裝入層析柱。
4、離子交換層析法
離子交換層析的原理是利用一些帶離子基團的纖維素或凝膠，吸附交換帶相反電荷的蛋白質抗原。由於各種蛋白質的等電點不同，所帶的電荷量不同，與纖維素(或凝膠)結合的能力有差別。
5、親和層析
親和層析是利用生物大分子的生物特異性，即生物大分子間所具有專一親和力而設計的層析技術。例如抗原和抗體、酶和酶抑制劑(或配體)、酶蛋白和輔酶、激素和受體、igg和葡萄球菌蛋白a(spa)等物質間具有一種特殊的親和力。
如何用western blot方法從細胞培養上清中檢測目的蛋白
10樓：
western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。
核酸提取中除去蛋白質的方法主要有哪幾種？
11樓：墨汁諾
可以用氯仿抽提之後離心，離心後分三層，下層有機層中有一些脂溶性的雜質，專中間層屬白色絮狀沉澱是蛋白，上清液中即含有核酸。也有很多試劑盒，是可以把核酸掛在柱子上，把蛋白質等雜質離心掉，這個方法即快捷又方便。
凝膠過濾，這是很容易去除小分子雜質物質的方法。
如果蛋白樣本和核酸的分子大小差別比較大，可以考慮用超濾的方法。
超濾是以壓力為推動力的膜分離技術之一，以大分子與小分子分離為目的 。
加入核酸酶消化三個小時。
比如加一定量的dnaase 和rnase酶消化。
12樓：更行更遠
可以用氯仿bai抽提之後離心啊，這du樣的話，離心後分三層zhi，下層有dao機層中有一些脂溶性的雜版質，中間層白色絮狀沉澱是權蛋白，上清液中即含有核酸；
現在也有很多試劑盒，是可以把核酸掛在柱子上，把蛋白質等雜質離心掉，這個方法即快捷又方便，但好像對rna的話，效果不太好
13樓：匿名使用者
一般用氯仿/異戊醇去除
14樓：匿名使用者
最常用的方法是苯酚/氯仿、氯仿兩步抽題法
如何確定作westernblot的蛋白質大小
用蛋白marker做對比分子量大小。用內參 對照樣品做蛋白表達量相對變化分析。為什麼western blot結果中,蛋白質檢測分子量會與計算大小不同 western blot檢測分子量的結果與理論計算值有差異是非常正常的 事情western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情...
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