1樓:哊點壞
用作克復隆載體的理想質制
粒一般具備下述特點:
1具有鬆馳型
複製子(如cole1),複製子(replicon)是質粒自我增殖所必不可少的基本條件,並可協助維持使每個細胞含有一定數量的質粒拷貝。
2在複製子外存在幾個單一的酶切位點(或多克隆位點),以便目的dn**段插入。
3具有插入失活的篩選標記,理想的質粒載體應具有兩種抗菌素抗性標誌,如氨苄青黴素抗性基因(ampr)和四環素抗性基因(tetr)等,以便從平板中直接篩選陽性重組子。
4分子量相對較小和較高的拷貝數。此外,質粒的缺點是容量較小,一般只能接受小於15kb的外來dna,插入片段過大會導致重組子擴增速度減慢,甚至使插入片段失活。主要是對目的基因克隆,建立dna文庫和cdna文庫,其上有複製子即可。
用於重組dna技術的質粒載體在結構上有什麼特點
2樓:北京索萊寶科技****
重組dna技術的質粒載體的結構特點:
環狀,具有多個限制酶切點,便於限制酶切割。
複製起點,重組後可以複製讓外源基因能複製。
環狀dna分子能夠自我複製,或整合到染色體上,隨染色體複製。
有標記基因(便於進行檢驗)。
有標籤 便於最後分離純化蛋白用。
載體dna分子大小應適合,以方便操作。
對受體細胞無害,不影響受體細胞正常的生命活動。
載體大小:
大的質粒(大於15kb)不會很好轉化而且dna產量通常很低。在設計實驗時要考慮到加入插入片段的最終載體大小,儘量用更小的載體。
相容性當多於一個質粒載體必須同時存在於同一個細菌細胞中,這兩個質粒的複製子必須是相容的。當他們不能穩定地共存時,則認為這兩個質粒是不相容的。
選擇/檢測插入片段:
為了鑑別質粒中是否含有插入片段,對一些載體進行了工程改造,這樣產生的多位點接頭的分離會引起可見的表型。例如:lacz基因的應用(多位點接頭的分離會引用白細胞的生長而抑制藍細胞的生長,如pu19)和cccdb基因(調控細胞死亡)的應用(分離會促進細胞存活)。
篩選特徵:
選擇質粒載體的要素是要了解可用到的載體的特徵和**重組克隆所用於的實驗。
所有的質粒載體都有三個共同的特徵:一個複製子、一個選擇性標誌和一個克隆位點。複製子是含有dna複製起始位點的一段dna(ori),也包括表達由質粒編碼的複製必需的rna和蛋白質的基因。
選擇性標誌對於質粒在細胞內持續存在時必不可少的。克隆位點是限制性內切酶切割位點,外源性dna可由此插入質粒內,而且並不影響質粒的複製能力,或為宿主提供選擇性表型。
選擇性標誌:編碼抗生素抗性的基因對質粒載體來說是最普遍的細菌選擇性標誌(如pbr322);主要的抗生素選擇基因有:氨苄青黴素,氯黴素,四環素和卡那黴素四種。
轉化的宿主菌一般都是抗生素敏感型的,獲得質粒後,它能在有抗生素的平板上生長,從而達到篩選的要求。另一個顯性的選擇標誌就是對λ噬菌體感染的免疫(也就是λ阻抑物)。有時也會用的一些隱性標誌,如leub-(亮氨酸存在時就不能生長)。
3樓:蠻燦真祺
特點如下:
1,環狀dna分子能夠自我複製,或整合到染色體上,隨染色體複製。
2,有多個限制酶切點(便於切割)。
3,有標記基因(便於進行檢驗)。
基因克隆的載體有哪些基本特徵
4樓:匿名使用者
基因載體是攜帶目的基因、實現目的基因無性繁殖或表達有意義的蛋白質所採用的dna分子。內分為克隆載體和容表達載體。可用做基因載體的有:
質粒dan、噬菌體dna和病毒dna。克隆載體應具備以下基本特徵:自我複製能力、具有篩選標誌基因和多個限制性核酸內切酶的單一位點等。
表達載體除具有以上特徵外,還應具有啟動子等轉錄調控序列、適當的翻譯控制序列、合理設計的多克隆位點等。
5樓:
1.要有可轉移性 已進入宿主細胞
2.要有自主複製或者是整
合功能 能攜帶目的基版因一起穩定複製權或表達3.要是足夠大的裝載量 如pla**id 15kb yac 400kb
4.要有合適的篩選標記 便於篩選
5.有合適的多克隆位點 便於目的基因的插入6.要足夠安全
6樓:匿名使用者
1.必須大小合適,復否則影響複製制效率。
2.必須能夠自主複製。
3.必須要有很多限制酶的單一位點,現在的人工載體都含有所謂的多克隆位點。
4.要有一合適的可調控的啟動子和增強子,方便基因表達與調控。
5.必須要有合適的選擇性標記,即能夠證明載體確實已經匯入,並證明載體確實插入了目的基因。
質粒作為基因工程常用載體必須具備的條件
7樓:匿名使用者
三個條件
1 能在宿主細胞內複製並穩定儲存
2.具有多個限制酶切位點 方便剪下
3.具有標記基因 有利於檢測
8樓:匿名使用者
克隆載體:克隆位點,複製子,標記基因
表達載體:啟動子,終止子,多克隆位點,複製子,標記基因
9樓:匿名使用者
在宿主細胞內較穩定,
能複製便於篩選
方便進行插入,剪下等基因操作
10樓:匿名使用者
最基本的,要有足夠大的拷貝數
11樓:最愛獸獸
你是在完成暑假作業吧?基因工程常考點清單。。。
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