為準確地測定蛋白酶的活力,在操作中應注意哪些因素

2021-03-03 21:24:16 字數 1939 閱讀 3185

1樓:牽著你的手

影響酶活力bai的因素du有哪些?

答:酶活力是酶zhi催化某一化學反應

dao的速率來表示的回

。酶活答

力的大小即酶含量的多少,可以用每克酶製劑或每毫升酶製劑含有多少酶單位來表示,酶活力的測定也就是測定酶促反應的速率。

1酶濃度對酶活力的影響:酶促反應速率與酶分子的濃度呈正比,在一定範圍內,當底物分子濃度足夠時,酶分子越多,底物轉化的速度越快。

2底物濃度對酶活力的影響:若酶的濃度為定值,底物的起始濃度越低時,酶促反應速度與底物濃度呈正比,即隨地物濃度的增加而增加。當所有的酶與底物結合生成中間產物後,即使再增加底物濃度,中間產物濃度也不會增加,酶促反應速度也不會增加。

3溫度對酶活力的影響:在適宜的溫度範圍內,酶促反應速度隨溫度升高而增加,超過最適反應溫度,酶活力將會下降。

4ph對酶活力的影響:酶在最適ph範圍內表現出活性,大於或小於最適ph,都會降低酶活性。

5啟用劑對酶活力的影響:某些無機陽離子、陰離子、有機化合物可作為啟用劑,能夠啟用酶,使其表現出催化活性或強化其催化活性。

6抑制劑對酶活力的影響:酶的抑制劑能夠減弱、抑制甚至破壞酶的活力,它可降低酶促反應速度。

酶活力測定的注意事項有哪些

2樓:牙口竟品點

注意事項:

1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10~20km為宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍。

2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。

3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40°C,高於或低於最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37°C。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。

溫度係數指溫度每升高10°C,化學反應速度增加的倍數。q10通常為l~2。由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1°C。

4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低,多數酶的最適ph在5~8之間。在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力。

為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使ph不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。

5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如zn2+是羧基肽酶的輔基,mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。

6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高,例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑,cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時,也要滿足酶對啟用劑的需要。

7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。

綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。

測定蛋白酶活力時為什麼要嚴格控制反應時間

3樓:匿名使用者

時間不準確,測定資料就不準確。

酶活力單位的名詞解釋寫的很清楚了

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