總DNA電泳拖尾嚴重是什麼原因

2025-07-21 12:15:04 字數 2379 閱讀 8834

1樓:世名頂點科技

有可能是以下原因:

1、電壓過大;2、緩衝溶液調子濃度過高;3、梳子深度;4上樣量過多;5、酶切不完全;6、dna發生了降解。

2樓:匿名使用者

1.電壓過大,根據電泳槽設定合適的電壓;2.緩衝溶液離子濃度過高,調整鹽濃度在以下;3.

梳子插得過深,樣品從膠板下部通過,梳子底部與膠槽應隔1-2mm(限於水平電泳);4.上樣量過多,稀釋dna樣品濃度或者減少上樣量;5.酶切不完全,使用活性酶重新酶切;發生了降解,重新提取dna,並且加入dnase的抑制劑或者足夠量的蛋白質的變性劑。

dna拖尾現象是什麼原因

3樓:美迪拓

1 首先你的上樣量太大,可能早晨有些拖尾現象;

2 點樣孔有東西,可能是有蛋白質汙染,可以用酚氯仿抽提純化看看還有沒有;

3 右起第二個樣品,可能是rna沒有除乾淨,有rna汙染,可以用rnase處理一下;

4 最左邊乙個樣,dna明顯發生部分降解,有拖帶。

dna電泳為什麼標記的分子量大了就拖帶,什麼原因?

4樓:網友

一般大分子量是會有些拖尾,但是不會這麼嚴重。可能有以下一些原因:1、電泳電壓太高;2、緩衝液放置太久;3、凝膠質量不理想(對你這個結果而言這種可能性不太大);4、凝膠濃度偏高。

5樓:網友

應該是大片段很容易降解吧,而且你跑的時間也挺長,所以緩衝液一般需要新的並且注意dna酶的汙染,還有個是不是上樣的濃度太高了,可以上幾何倍數稀釋的梯度試試。當然要跑大分子的話有必要降低膠的濃度。

質粒跑電泳,拖尾很嚴重,是什麼原因

6樓:北京索萊寶科技****

提純的純度不夠,就是雜質太多了。

被開啟的質粒跑的慢,完整的跑的快,建議上樣少點,避免裂的過久。

如何防止dna電泳拖尾

7樓:北京索萊寶科技****

pcr擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。

其原因往往由於酶量過多或酶的質量差或酶的專一性不夠,dna模板量過大,dntp濃度過高,mg2 濃度過高,退火溫度過低,迴圈次數過多,模板長於3kd所引起。

減少酶量(一般以2單位taq dna聚合酶為基點,分梯度上下調一調,其他酶也差不多如此濃度,可以參考說明書);加強dna聚合酶的專一性或調換另一**的專一性更好的dna聚合酶。

增加dna聚合酶的專一性。

1)改用專一性更強的dna聚合酶,或者使用兩種不同的dna聚合酶,減低酶量或調換另一**的專一性高的酶。更換dna聚合酶時,酶量不要太大,以免出現特異性擴增。 (2)酶製劑中的甘油可能也是干擾因素。

可以加入反應體系之前用超濾去除酶製劑中的甘油,若此操作引起酶的濃度過高,可以適當加雙蒸餾水稀釋。

3)為了加強taq dna聚合酶的專一性。 的專一性,可在反應體系中加入:的甜菜鹼或者5%的dmso可以提高pcr擴增效率,兩者可以增加taq dna聚合酶的穩定性。

適當減少dntp的濃度;減少dntp的濃度一般需要與降低mg2 濃度同方向偶聯進行,但是不必按同樣的比例。

適當降低mg2 濃 度,可以採用梯度遞減方式,以每次遞減,但是mg2 的終濃度不要低於。

縮短pcr反應的退火溫度時間或調高復性溫度。沒有重新設計引物之前,不要大範圍地變動反應體系的復性溫度,要在引物的tm少5-10度的範圍內變動。如果出現非特異性擴增,則在引物的tm少5-10度的範圍內把pcr反應的復性溫度提高1-3度。

使用梯度降低pcr。在以基因組dna為模板進行pcr擴增時,非特異性擴增較多,這時,最初的退火溫度選用比tm高5-10度。然後每隔1個迴圈,退火溫度降低1-2度,直至到達正常的tm附近的退火溫度。

採用使用專一性更強的梯度降低pcr、熱啟動pcr和巢式pcr。使用熱啟動模式。使用熱啟動時可以購買商用的pcr熱啟動酶,也可以用石蠟隔離模式。

巢式pcr也有現成的試劑盒可以購買。

保證pcr反應的dna模板的質量,要用電泳檢測一下分子量和純度,質量不好則要重新提取和純化dna模板;適當增加dna模板量,減少迴圈次數。

以上措施都不行時,最後就只能重新設計引物,加強引物的專一性。

適當減少dna模板量。

適當減少迴圈次數,一般也就迴圈25次就差不多了。

pcr產物跑的電泳,為什麼dna都有拖尾

8樓:北京索萊寶科技****

pcr產物電泳拖尾,可能有如下原因:a.模板不純。b.退火溫度偏低。c.酶量過多,dntp、mg2+濃度偏高。d.迴圈次數過多。

解決辦法:a.純化模板。b.適當提高退火溫度。c.降低酶量,適當降低dntp和鎂離子的濃度。d.減少迴圈次數。

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