請各位幫我解決乙個關於細菌DNA的提取的問題

2025-07-19 20:10:16 字數 3136 閱讀 2607

1樓:愛是地獄

1乳酸桿菌是革蘭氏陽性細菌。必須加溶菌酶,(蛋白酶k沒有溶細胞壁的能力)

2不加蛋白酶k是可以的,但是需要其他蛋白酶替代,蛋白酶k的目的是水解蛋白質使dna可以更好的分離,獲得更純的dna。

細菌dna提取過程中各部藥品的作用

2樓:百優生物

其實提取細菌基因組dna並不是要用到上面提到的所有試劑。

te是用來浮起細菌的。如。

專果是陽性菌的話最好是用溶菌屬酶處理一下。

sds可以讓細胞裂解,並與核蛋白結合(當然也包括dna)。蛋白酶k自然是降解蛋白的。到這一步可以直接用異丙醇沉澱,70%乙醇洗一次(洗去少量的鹽分)。

涼得差不多再用少量te溶解就得到dna了。

當然,在蛋白酶k處理過後,也可以用 nacl沉澱一下蛋白(dna在此濃度溶解度增加,而蛋白減小)。或者用酚:氯仿:

異戊醇(25::24:1)ph>抽提,去蛋白。

其後依舊用異丙醇沉澱,70%乙醇洗。

ctab/nacl功能與sds相當,但一般用於提取植物基因組。

3樓:網友

鹼法質粒抽提用到三種溶液:溶液i,50 mm葡萄糖 / 25 mm tris-cl / 10 mm edta,ph ;溶液ii, n naoh / 1% sds;溶液iii,3 m 醋酸鉀。

細菌基因組dna提取時常遇到哪些問題怎樣解決

4樓:愛笑的星星閃閃

二、裝置。

移液管, 高速冷凍離心機, 臺式離心機,水浴鍋。

三、試劑。1、ctab/nacl溶液: nacl溶解於80ml h2 o,緩慢加入10g ctab,加水至100ml。

2、其它試劑:氯仿:異戊醇(24:

1),酚:氯仿:異戊醇(25:

24:1),異丙醇,70% 乙醇,te,10% sds,蛋白酶 k (20mg/ml或粉劑),5mol/l nacl。

四、操作步驟:

1. 100ml 細菌過夜培養液, 5000rpm離心10分鐘, 去上清液。

2. 加 te懸浮沉澱, 並加 10% sds, 50μl 20mg/ml(或1mg乾粉)蛋白酶 k, 混勻, 37℃保溫1小時。

3. 加 5mol/l nacl, 混勻。

4. 加 ctab/nacl溶液, 混勻, 65℃保溫20分鐘。

5. 用等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm離心10分鐘, 將上清液移至乾淨離心管。

6. 用等體積氯仿:異戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至乾淨管中。

7. 加1倍體積異丙醇, 顛倒混合, 室溫下靜止10分鐘,沉澱dna。

8. 用玻棒撈出dna沉澱, 70%乙醇漂洗後, 吸乾,溶解於1ml te, -20℃儲存。如dna沉澱無法撈出,可5000rpm離心, 使dna沉澱。

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煮沸法提取細菌dna 為什麼只適用於革蘭氏陽性

5樓:我真不知道為什

還有這樣的說法? 我用的是吉恩特的試劑盒,陽性、陰性都可以提。

如何從病料中提取細菌的dna

6樓:儒雅的酒酒酒發

以下是從動物病毒中快速提取dna的方法,請參考。

該方案採用離心操作,適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組dna。以下步驟都在室溫下進行。

1. 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿,充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘餘組織。

2. 取150 μl上清液至新的潔淨離心管中。

3. 加入500 μl dna提取液至上清液中,顛倒混勻,室溫靜置5-10min裂解病毒。

4. 把dna吸附柱裝在2ml收集管中,把裂解後的液體全部轉移至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。

5. 倒棄濾液,把dna吸附柱裝**集管中,加入400 μl洗滌液至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。

注:洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。使用完立即蓋上蓋,以防乙醇揮發。

6. 重複步驟5。

7. 倒棄收集管中的濾液,把dna吸附柱裝**集管中,10,000 rpm離心3 min。

8. 把dna吸附柱裝在新的潔淨離心管中,加入30-50 μl洗脫液至吸附柱**,靜置1-2min,10,000 rpm離心1min,所得即為dna溶液,可用於後續實驗,若暫時不用,應於-20 ℃可儲存。

細菌染色體dna的提取各個步驟原理!跪謝~~

7樓:任魄百里天翰

①差速離心,可以將兩種dna分離。

凝膠電泳,分離開兩種dna後,將遷移最慢的條帶(染色體dna)剪下,用洗脫液洗脫下來。

鹼變性裂解法,細菌懸浮液在高鹼性條件下,染色體和蛋白質變性,質粒dna由於其超螺旋共價閉合結構,雙鏈不會分離,再以的高鹽緩衝液調節其ph至中性,質粒dna可再度復性,其速度比染色體dna復性快,重新溶於溶液,而染色體dna復性慢,並且易與變性的蛋白質糾纏沉澱,短時間內離心可分離到粗染色體dna,而後除去蛋白質和rna就可得到染色體dna.

8樓:網友

1.取細菌培養物 ml 於5000 rpm離心1分鐘,傾去上清液。

2.取沉澱加100 μl預冷的溶液i搖勻並懸浮細胞,再加200 μl預冷的溶液ii搖勻後冰浴5分鐘,最後加入150 μl預冷的溶液iii搖勻後冰浴5分鐘,12000 ×g離心5分鐘或10000 ×g離心8分鐘。這一過程可使大部分的質粒dna被釋放至上清液中。

3.取上清液加等體積的苯酚—氯仿—異戊醇,5000 ×g離心4分鐘,再取上清液加入等體積氯仿於5000 rpm離心6分鐘。這一步驟主要是為了去除上清液中的蛋白質和脂類等雜質。

4.取上清液加等體積異丙醇,室溫放置5分鐘後12000 ×g離心5分鐘或10000 ×g離心8分鐘。75%乙醇浸洗沉澱兩次,冷凍乾燥後儲存於冷乙醇中或直接超低溫儲存。(這就是細菌dna提取的步驟)

9樓:肯德西

我記得好像是紅細胞把!

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