1樓:匿名使用者
乙個給定大小的線狀dna分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。dna電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關係。凝膠濃度的選擇取決於 dna分子的大小。
分離小於的dna段所需膠濃度是,分離大於10kb的dna分子所需膠濃度為,dna段大小間於兩者之間則所需膠濃度為。
凝膠電泳技術為什麼能分離dna
2樓:匿名使用者
你指得應該是瓊脂糖凝膠電泳。
dna分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。
dna分子在高於等電點的ph溶液中帶負電荷,在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重複性質,相同大小的雙鏈dna幾乎具有等量的淨電荷,而不同大小的dna所具有的淨電荷就不一樣,在同樣電場條件下受力也不一樣。
其次,dna分子在凝膠中也會受到阻力影響,阻力有dna的大小和結構決定。大小就是脫氧核糖核苷酸量(或說分子量大小),分子量dna的一般結構在相同環境下遷移速度關係如下:環狀》雙鏈》環狀開環。
瓊脂糖凝膠電泳分離dna與聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質原理方法上有什麼異同?
3樓:網友
dna電泳一般使用的都是瓊脂糖凝膠電泳,電泳的驅動力靠dna骨架本身的負電荷。
蛋白質電泳(一般指sds-page)一般使用的都是聚丙烯醯胺凝膠電泳,電泳的驅動力靠與蛋白質結合的sds上所攜帶的負電荷。
所以相同點就是樣品都是帶負電荷的,從負極向正極移動,移動的距離都和樣品的分子量有關。而且這兩個電泳體系可以互相交換使用。進行大分子蛋白質電泳時,可以考慮換用瓊脂糖凝膠,因為該體系孔徑大。
相反,如果需要精確到各位數鹼基的dna電泳也可以使用聚丙烯醯胺凝膠系統,因為使用該系統可以將相差乙個鹼基的兩條dna鏈分開。
不同點首先是樣品不同。這個就不用多說了。其次是結果的觀察方法不同。
dna電泳普遍使用eb做染料,在紫外燈下觀察;而蛋白電泳使用的考馬斯亮藍染色,還需要經過脫色步驟,不過觀察起來比較簡單。還有就是膠體系的差別,dna電泳通常是一膠跑到底,而蛋白質電泳則會有分離膠和濃縮膠之區別。
電泳中樣品移動的本質確實是樣品所攜帶的電荷。但是,區分這些條帶直接可以用分子量而無需使用電荷數,是因為這些樣品的電荷/分子量比都是恆定的了。以dna分子為例,它在電泳中的移動是靠其骨架中磷酸所攜帶的負電荷來實現的,而這個磷酸分子又是每乙個核苷酸中都有的,所以dna分子所攜帶的負電荷數是由其核苷酸總數決定的。
而且,dna分子中核苷酸的組成動輒成百上千,在如此大的分子量面前,討論單個核苷酸之間分子量的差別就顯得毫無意義。這樣,dna分子中負電荷的量就可以用dna的分子量來代替,反過來,dna的分子量也就可以用dna分子所攜帶的電荷來代替(一句話,dna分子的電荷/分子量比是恆定的)。
這在蛋白電泳中(特別是sds-page中)是一樣的。在sds-page中,sds將蛋白質變性成直線分子並緊密包裹於其上,使得其所攜帶的電荷與蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸電泳一樣了。
至於為什麼核酸的橫著跑,蛋白豎著跑,個人認為最大的問題是蛋白制膠的過程導致的。蛋白制膠由於使用了兩種不同的凝膠系統,所以需要乙個水平的分介面。這個分介面在配膠的過程中是依靠異丙醇在重力作用下的壓力下形成的。
所以,一併就豎著跑了~~
你也是搞生化的?
在瓊脂糖凝膠電泳分離提純dna過程中,怎麼判斷在電泳前凝膠擺放正負的方向是否準確?(沒有注意到有什
4樓:喝汽油的鹽
電泳要注意的是電極的正負,電極的正負決定了蛋白質的方向。
蛋白質不會從凝膠裡跑出來,上樣的意思就是加入樣品。比如你要檢測乙個樣品,在將這個樣品加入到檢驗儀器上的操作就叫上樣。
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用是分子標記。dna分子標記具有的優越性有 大多數分子標記為共顯性,對隱性性狀的選擇十分便利 基因組變異極其豐富,分子標記的數量幾乎是無限的 在生物發育的不同階段,不同組織的dna都可用於標記分析 分子標記揭示來自dna的變異 表現為中性,不影響目標性狀的表達,與不良性...
瓊脂糖凝膠電泳後的結果可以放多久再檢測
這要取決你儲存的環境,度下,當天測沒問題,室溫就不好說了,最好兩個小時以內,還有就是不要長時間把膠泡在buffer裡,會擴散的。跑完後四度封膜,可隔天再檢。瓊脂糖凝膠電泳跑完割下的含有dn 段的膠能在度冰箱放多久?在不能馬上做 的時候 dna水溶液能在 放多久,凝膠就能放多久。凝膠中的dna降解不是...
瓊脂糖配的培養基有什麼影響嗎
諒脂糖配的培養基對微生物的生長和形態有很大的影響。首先,諒脂糖是由葡萄糖螞餘和胺基酸組成的,能夠提供碳源和氮源,對於嗜熱菌等微生物的生長有很大的促進作用。搜衫其次,不同濃度的諒脂糖配比可影響細胞生長的速率和數量,能夠改變細菌的發育和生長形態,如細胞大小 群落形態 色素表達等。最世物腔後,諒脂糖還可以...