1樓：匿名使用者
如果是前者，可能確實需要從細胞提總蛋白，pierce的試劑盒肯定是首選的了，細胞量也應該問題不大，腹水收的細胞量還是相當大的
但是如果是後者不如考慮異源表達，可能更方便後續的試驗
如何提取細胞膜（動物細胞）上的蛋白質
2樓：
一，蛋白質（包括酶）的提取
大部分蛋白質都可溶於水、稀鹽、稀酸或鹼溶液，少數與脂類結合的蛋白質則溶於乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中，因些，可採用不同溶劑提取分離和純化蛋白質及酶。
（一）水溶液提取法
稀鹽和緩衝系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時需要均勻的攪拌，以利於蛋白質的溶解。提取的溫度要視有效成份性質而定。一方面，多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利於溶解，縮短提取時間。
但另一方面，溫度升高會使蛋白質變性失活，因此，基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作。為了避免蛋白質提以過程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）。
下面著重討論提取液的ph值和鹽濃度的選擇。
1、ph值
蛋白質，酶是具有等電點的兩性電解質，提取液的ph值應選擇在偏離等電點兩側的ph 範圍內。用稀酸或稀鹼提取時，應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化，從而導致蛋白質構象的不可逆變化，一般來說，鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液。
2、鹽濃度
稀濃度可促進蛋白質的溶，稱為鹽溶作用。同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合，具有保護蛋白質不易變性的優點，因此在提取液中加入少量nacl等中性鹽，一般以0.15摩爾。
升濃度為宜。緩衝液常採用0.02-0.
05m磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。
（二）有機溶劑提取法
一些和脂質結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質和酶，不溶於水、稀鹽溶液、稀酸或稀鹼中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質結合緊密的蛋白質和酶特別優越，一是因為丁醇親脂性強，特別是溶解磷脂的能力強；二是丁醇兼具親水性，在溶解度範圍內（度為10%，40度為6.
6%）不會引起酶的變性失活。另外，丁醇提取法的ph及溫度選擇範圍較廣，也適用於動植物及微生物材料。
二、蛋白質的分離純化
蛋白質的分離純化方法很多，主要有：
（一）根據蛋白質溶解度不同的分離方法
1、蛋白質的鹽析
中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，此稱鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降並先後析出，這種現象稱鹽析，將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的so4和nh4）有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之「失水」，於是蛋白質膠粒凝結並沉澱析出。鹽析時若溶液ph在蛋白質等電點則效果更好。由於各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉澱。
影響鹽析的因素有：
（1）溫度：除對溫度敏感的蛋白質在低溫（4度）操作外，一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質溶介度降低。
但有的蛋白質（如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白）在較高的溫度（25度）比0度時溶解度低，更容易鹽析。
（2）ph值：大多數蛋白質在等電點時在濃鹽溶液中的溶介度最低。
（3）蛋白質濃度：蛋白質濃度高時，欲分離的蛋白質常常夾雜著其他蛋白質地一起沉澱出來（共沉現象）。因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋，使蛋白質含量在2.5-3.0%。
蛋白質鹽析常用的中性鹽，主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。 其中應用最多的硫酸銨，它的優點是溫度係數小而溶解度大（25度時飽和溶液為4.1m，即767克/升；0度時飽和溶解度為3.
9m，即676克/升），在這一溶解度範圍內，許多蛋白質和酶都可以鹽析出來；另外硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好，不易引起蛋白質變性。硫酸銨溶液的ph常在4.5-5.
5之間，當用其他ph值進行鹽析時，需用硫酸或氨水調節。
蛋白質在用鹽析沉澱分離後，需要將蛋白質中的鹽除去，常用的辦法是透析，即把蛋白質溶液裝入秀析袋內（常用的是玻璃紙），用緩衝液進行透析，並不斷的更換緩衝液，因透析所需時間較長，所以最好在低溫中進行。此外也可用葡萄糖凝膠g-25或g-50過柱的辦法除鹽，所用的時間就比較短。
2、等電點沉澱法
蛋白質在靜電狀態時顆粒之間的靜電斥力最小，因而溶解度也最小，各種蛋白質的等電點有差別，可利用調節溶液的ph達到某一蛋白質的等電點使之沉澱，但此法很少單獨使用，可與鹽析法結合用。
3、低溫有機溶劑沉澱法
用與水可混溶的有機溶劑，甲醇，乙醇或丙酮，可使多數蛋白質溶解度降低並析出，此法分辨力比鹽析高，但蛋白質較易變性，應在低溫下進行。
（二）根據蛋白質分子大小的差別的分離方法
1、透析與超濾
透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開。
超濾法是利用高壓力或離心力，強使水和其他小的溶質分子通過半透膜，而蛋白質留在膜上，可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質。
2、凝膠過濾法
也稱分子排阻層析或分子篩層析，這是根據分子大小分離蛋白質混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝膠（sephadex ged）和瓊脂糖凝膠（agarose gel）。
（三）根據蛋白質帶電性質進行分離
蛋白質在不同ph環境中帶電性質和電荷數量不同，可將其分開。
1、電泳法
各種蛋白質在同一ph條件下，因分子量和電荷數量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳，這是利用一種兩性電解質作為載體，電泳時兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的ph梯度，當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時，到達各自等電點的ph位置就停止，此法可用於分析和製備各種蛋白質。
2、離子交換層析法
離子交換劑有陽離子交換劑（如：羧甲基纖維素；cm-纖維素）和陰離子交換劑（二乙氨基乙基纖維素；deae?font face="宋體" lang="zh-cn">纖維素），當被分離的蛋白質溶液流經離子交換層析柱時，帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上，隨後用改變ph或離子強度辦法將吸附的蛋白質洗脫下來。
（詳見層析技術章）
（四）根據配體特異性的分離方法－親和色譜法
親和層析法（aflinity chromatography）是分離蛋白質的一種極為有效的方法，它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很複雜的蛋白質混合物中分離出來，而且純度很高。這種方法是根據某些蛋白質與另一種稱為配體（ligand）的分子能特異而非共價地結合。其基本原理：
蛋白質在組織或細胞中是以複雜的混合物形式存在，每種型別的細胞都含有上千種不同的蛋白質，因此蛋白質的分離（separation），提純（purification）
和鑑定（characterization）是生物化學中的重要的一部分，至今還沒的單獨或一套現成的方法能移把任何一種蛋白質從複雜的混合蛋白質中提取出來，因此往往採取幾種方法聯合使用。
怎樣提取細胞質或細胞核中的蛋白
3樓：匿名使用者
細胞比較簡單，只有細胞膜，抽提過程中，很容易破壞細胞膜，從而得到蛋白，相應蛋白中受到其他物質干擾也比較少，樣品較為乾淨。
但是用組織的時候，組織由細胞組成，但是從組織中抽提丹巴就要複雜，做組織勻漿以後，再分離組織碎片和蛋白，但是分離過程可能沒有那麼好，組織中含有的各種雜質，雜蛋白就比細胞中要多，要複雜。因此選擇適當的方法提取組織蛋白，對於後續的western來說還是非常重要的，這也是為什麼細胞的蛋白做wb挺好，但是換到組織，可能有些條件就需要進一步優化了。
求助：怎麼提取細胞上清液中的蛋白
4樓：匿名使用者
怎麼提取細胞上清液中的蛋白 western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各
個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。細胞比較簡單，只有細胞膜，抽提過程中，很容易破壞細胞膜，從而得到蛋白，相應蛋白中受到其他物質干擾也比較少，樣品較為乾淨。但是用組織的時候，組織由細胞組成，但是從組織中抽提丹巴就要複雜，做組織勻漿以後，再分離組織碎片和蛋白，但是分離過程可能沒有那麼好，組織中含有的各種雜質，雜蛋白就比細胞中要多，要複雜。
因此選擇適當的方法提取組織蛋白，對於後續的western來說還是非常重要的，這也是為什麼細胞的蛋白做wb挺好，但是換到組織，可能有些條件就需要進一步優化了。
5樓：秋雨梧桐葉落石
要看你細胞培養上清也中的蛋白是否帶有his標籤，或者具有金屬離子結合作用了。
怎麼從懸浮細胞中提取蛋白做wb
6樓：匿名使用者
細胞比較簡單，只有細胞膜，抽提過程中，很容易破壞細胞膜，從而得到蛋白，相應蛋白中受到其他物質干擾也比較少，樣品較為乾淨。
但是用組織的時候，組織由細胞組成，但是從組織中抽提丹巴就要複雜，做組織勻漿以後，再分離組織碎片和蛋白，但是分離過程可能沒有那麼好，組織中含有的各種雜質，雜蛋白就比細胞中要多，要複雜。因此選擇適當的方法提取組織蛋白，對於後續的western來說還是非常重要的，這也是為什麼細胞的蛋白做wb挺好，但是換到組織，可能有些條件就需要進一步優化了。
如何提取細胞上清中的有意義蛋白
7樓：文帝寶寶
做細胞培液上清中的蛋白，應該用無血清培液。光牛血清中的蛋白就夠你分析的了，更何況多數分泌蛋白的量都是含量很少的。
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