Brdu檢測細胞週期結果如何用FlowJ分析

2021-03-07 01:00:45 字數 3644 閱讀 6401

1樓:匿名使用者

細胞增值的檢驗方法:brdu標記法1、細胞以1.5*105/ml細胞數接種於直徑35ml培養

皿中,培養一天,用含0.4%fcs培養液同步化三天,使絕大多數細胞處於go期。2、終止細胞培養前,加入brdu,37℃孵育40min。

3、棄培養液,波片用pbs洗滌3次。4、甲醇/醋酸固定10min。5、經固定的波片空氣乾燥,0.

3%h2o2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。6、5%正常兔血清封閉。7、甲醯胺100℃,5min變性核酸。

8、冰浴冷卻後pbs洗滌,加1抗即抗小鼠細胞增值的檢驗方法:brdu標記法1、細胞以1.5*105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中,培養一天,用含0.

4%fcs培養液同步化三天,使絕大多數細胞處於go期。2、終止細胞培養前,加入brdu,37℃孵育40min。3、棄培養液,波片用pbs洗滌3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。5、經固定的波片空氣乾燥,0.3%h2o2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6、5%正常兔血清封閉。7、甲醯胺100℃,5min變性核酸。8、冰浴冷卻後pbs洗滌,加1抗即抗小鼠brdu單抗,陰性對照加pbs或血清。

9、按abc法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及brdu陽性細,數,計算標記指數。rdu單抗,陰性對照加pbs或血清。9、按abc法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及brdu陽性細,數,計算標記指數。

2樓:匿名使用者

你要先在fsc和ssc散點圖上gate出細胞,然後ssc-w和ssc-hgate出單細胞,然後在用brdu/pi 散點圖開啟才能開的比較清楚的圖。

3樓:匿名使用者

你將來要出生的孩子,可能會同時具有以下四種特點:

(1)龍鳳胎。(2)兒子。(3)天才。(4)健康。

一、現在因為種種原因,要求你放棄其中一項,你劃掉那個?

二、現在要求你在剩餘的三項種劃掉一項,你劃掉哪個?

三、現在要求你在剩餘的兩項種選擇屬於你的一項,你選擇哪一個?

4樓:手機使用者

可能生活環境和受教育程度不同,所以很多觀念和想法不同,這種事情也不能一邊倒的去看,畢竟很多系列我們也不太清楚!只要讓自己站在更高的位置,看更遠的地方!很多事情也就有了答案!

5樓:匿名使用者

過情人節了沒什麼好說的

6樓:曉韓

壓低不能洗澡,血壓低的人群對於水溫很敏感,水溫過高,就會導致低血壓人群的血管出現擴張,然後會慢慢感覺自己的大腦出現眩暈狀態,有時候甚至突然倒地不起,對於老年人來說,如果這種情況後果是非常大的。2.體質差不能洗澡,對於那些體質本來就比較差的人來說,如果洗個冷水澡,那可真受折磨了,因為體質差的人遇冷容易受到刺激,有時候會出現感冒、發燒等問題,但是,也並不是說體質差的人就不可以碰冷水,日常的冷水洗臉、洗腳還是可以的,但是千萬別洗澡。

7樓:匿名使用者

wifixiajdhfnbkjshbsx

8樓:匿名使用者

企業所得稅改革是本次減稅法案的核心,也得到美國商界的普遍支援。根據稅改法案,美國聯邦企業所得稅稅率將從現在的35%降至21%;對美國企業留存海外的利潤一次性徵稅,其中現金利潤的稅率為15.5%;推行「屬地制」徵稅原則,即未來美國企業的海外利潤將只需在利潤產生的國家交稅,而無需向美國**交稅。

為鼓勵企業長期投資,企業所得稅稅改內容是永久的。企業所得稅改革是本次減稅法案的核心,也得到美國商界的普遍支援。根據稅改法案,美國聯邦企業所得稅稅率將從現在的35%降至21%;對美國企業留存海外的利潤一次性徵稅,其中現金利潤的稅率為15.

5%;推行「屬地制」徵稅原則,即未來美國企業的海外利潤將只需在利潤產生的國家交稅,而無需向美國**交稅。為鼓勵企業長期投資,企業所得稅稅改內容是永久的。企業所得稅改革是本次減稅法案的核心,也得到美國商界的普遍支援。

根據稅改法案,美國聯邦企業所得稅稅率將從現在的35%降至21%;對美國企業留存海外的利潤一次性徵稅,其中現金利潤的稅率為15.5%;推行「屬地制」徵稅原則,即未來美國企業的海外利潤將只需在利潤產生的國家交稅,而無需向美國**交稅。為鼓勵企業長期投資,企業所得稅稅改內容是永久的。

企業所得稅改革是本次減稅法案的核心,也得到美國商界的普遍支援。根據稅改法案,美國聯邦企業所得稅稅率將從現在的35%降至21%;對美國企業留存海外的利潤一次性徵稅,其中現金利潤的稅率為15.5%;推行「屬地制」徵稅原則,即未來美國企業的海外利潤將只需在利潤產生的國家交稅,而無需向美國**交稅。

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5%;推行「屬地制」徵稅原則,即未來美國企業的海外利潤將只需在利潤產生的國家交稅,而無需向美國**交稅。為鼓勵企業長期投資,企業所得稅稅改內容是永久的。

9樓:匿名使用者

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流式細胞週期結果 怎麼分析

10樓:匿名使用者

細胞週期至少有兩種做法,最常見的如下圖分析:

這個是brdu和7-aad方法檢測細胞週期。紅色的gate就是g1期,綠色的就是s期,橙色的就是g2/m期。brdu, pi, 或者edu方法和這個一樣分析

如果單用pi等dna染料染色,需要專業軟體來分析計算了。

比如這個圖,是dna染料單染,其中粉色部分是g1期,黃色部分是s期,綠色部分是g2/m期。中間的分佈一般是通過flowjo這樣的軟體計算自動生成的。

用流式細胞儀檢測細胞週期,觀察哪些指標可以反應增殖,觀察哪些指標可以反應阻滯? 10

11樓:匿名使用者

你這個試驗bai必須要用

dubrdu加pi來檢測。pause-chase抑制**,zhi如果dao是抑制了最後一步,就會回出現g2期的堆積,g1期減少。如果抑制的答是dna合成,就會出現brdu陽性細胞的減少

促進的藥物會發現各個時間點細胞週期的有變化。你最好貼個圖我給你分析一下

流式細胞儀測定細胞週期各時相的原理和基本步驟(不用說具體使用的量)

12樓:匿名使用者

在細胞培養液中加入模擬核苷酸edu (比較老的方法也可以用brdu)。培養一小時 後,更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取並整合入新合成的dna。

培養一段時間後(一般小於一個細胞週期),固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同,使用不同的方法。edu,改變緩衝液的ph值,就會發出熒光。

而brdu則需用熒光抗體識別,需要對細胞膜和核膜進行通透處理。

再加入pi對dna染色。

在二維座標圖上,橫座標設為線性pi熒光強度,縱座標設為模擬核苷酸的熒光強度(log)。

典型的圖就像下面一樣:

g1, g2 和s期就按照圖中的劃分來做。g1期的細胞沒有新合成dna,所以brdu訊號是陰性,而pi的訊號位於1倍體期。s期是正在合成dna,所以brdu都是陽性。

g2期是已經合成好了2倍的dna,所以位於2倍體期,訊號是g1期的一倍。這個圖中,g1 pi訊號是300, g2就是600.

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