1樓：勞倫斯
rna的提取（僅供參考）
準備試劑：氯仿，異丙醇，75℅乙醇，無rnase的水或0.5℅sds(溶液均需用depc處理過的水配製)
操作步驟：
勻漿處理:
a. 組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml trizol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過trizol體積10℅。
b. 單層培養細胞 直接在培養板中加入trizol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。
trizol的用量應根據培養板面積而定，不取決於細胞數。trizol加量不足可能導致提取的rna有dna汙染。
c. 細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml trizol，反覆吸打。加trizol之前不要洗滌細胞以免mrna降解。
一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2. 將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白複合物完全分離。
3. 可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可於2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。
離心得到的沉澱中包括細胞外膜，多糖，高分子量dna，上清中含有rna。處理組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
4. 每使用1ml trizol加入0.2ml氯仿，劇烈振盪15秒，室溫放置3分鐘。
5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一箇中間層。rna主要在水相中，水相體積約為所用trizol試劑的60℅。
6. 把水相轉移到新管中，如要分離dna和蛋白質可保留有機相，進一步操作見後。用異丙醇沉澱水相中的rna。
每使用1ml trizol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
7. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出rna沉澱，離心後在管側和管底出現膠狀沉澱。移去上清。
8. 用75℅乙醇洗滌rna沉澱。每使用1ml trizol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鐘，棄上清。
9. 室溫放置乾燥或真空抽乾rna沉澱，大約晾5-10分鐘即可.不要真空離心乾燥，過於乾燥會導致rna的溶解性大大降低。
加入25-200μl無rnase的水或0.5℅sds,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鐘使rna溶解.如rna用於酶切反應,勿使用sds溶液。
rna也可用100℅的去離子甲醯胺溶解，-70℃儲存。
注意事項：
1. 從少量樣品（1-10mg組織或102-104細胞）中提取rna時可加入少許糖原以促進rna沉澱。例如加800ml trizol勻漿樣品，沉澱rna前加5-10μg rnase-free糖原。
糖原會與rna一同沉澱出來，糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響pcr反應。
2. 勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃儲存至少一個月。rna沉澱可以儲存於75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3. 分層和rna沉澱時也可使用臺式離心機，2600×g離心30-60分鐘。
用trizol法提取rna的方法及每一步的原理. 20
2樓：
實驗步驟：
1. 提取組織rna時，每50~100mg組織用1ml trizol試劑對組織進行裂解：提取細胞rna時，先離心沉澱細胞，每5~106個細胞加1ml trizol後，反覆用槍吹打或劇烈**以裂解細胞；
2. 將上述組織或細胞的trizol裂解液轉入ep管中，在試問15~30℃下放置5分鐘；
3. 在上述ep管中，按照每1mltrizol後加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上ep管蓋子，在手中用力**15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘後，12000g（2~8℃）離心15分鐘；
4. 去上層水相置於新ep管中，按照每1mltrizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘後，12000g（2~8℃）離心10分鐘；
5. 棄上清，按照每1ml trizol加1ml75% 乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；
6. 讓沉澱的rna在室溫在自然乾燥；
7. 用rnase-free water 溶解rna沉澱
各試劑的作用：
1、 trizol
主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制rna酶活性，因此trizol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源rnase（rna酶）。
trizol是從細胞和組織中提取總rna的即用型試劑，在樣品裂解或勻漿過程中，trizol能保持rna完整性。加入氯仿後，溶液分為水相和有機相，rna在水相中。取出水相，用異丙醇可沉澱**rna。
※0.1%的8－羥基喹啉可以抑制rnase，與氯仿聯合使用可增強抑制作用。
※異硫氰酸胍屬於解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質並使蛋白質二級結構消失，導致細胞結構降解，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞rnase蛋白質中的二硫鍵。
2、 氯仿
為有機溶劑與水互不相溶，rna（核糖核「酸」的鹽型）是離子化合物，溶於水相
3、異丙醇
能與與任意比例的水混合，因此加入異丙醇，能夠奪取rna/dna周圍的水分，rna/dna能夠聚集而發生沉澱。
求trizol提取rna的詳細步驟
3樓：6月時光
厚百提供：
1、在提取組織rna時，每50～100mg組織用1ml trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞rna時，先離心沉澱細胞，每5-10
╳106個細胞加1ml trizol後，反覆用槍吹打或劇烈振盪以裂解細胞。
2、將組織或細胞的trizol裂解液轉入ep管中,在室溫15~30c下放置5分鐘；在ep管中，按照每1ml
trizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上ep管蓋子，在手中用力**15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘後，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘。
3、取上層水相置於新ep管中,按照每1ml
trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘。
4、按照每1ml
trizol加1ml 75%乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清；讓沉澱的rna在室溫下自然乾燥；用rnase-free
water
溶解rna沉澱。
ps:在收集到生物材料之後，最好馬上進行rna製備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍後，儲存於-80℃冷凍櫃。
在製備rna時，將儲存於冷凍櫃的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免rnase的作用。
trizol法提取rna每個步驟的作用是什麼？
4樓：
trizol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有rnase抑制劑可保持rna的完整性。在加入氯仿離心後，溶液分為水相和有機相，rna在水相中。取出水相用異丙醇沉澱可**rna；用乙醇沉澱中間層可**dna；用異丙醇沉澱有機相可**蛋白質。
5樓：匿名使用者
我做過，把你不懂的哪些步驟補充一下吧。
請教一個關於trizol試劑提取rna步驟中的問題 20
6樓：此時情緒
洗滌的時增加轉速影響應該不大，不過沒有必要，增加到12000後，時間可以相對縮短，比如縮短到5min。晾乾過程，我的經驗是，看不到白色沉澱，但隱約可以看到透明狀又不至於消失完全看不到的時候可以加水溶解了。
7樓：匿名使用者
後者加到12000g是沒有影響的，因為rna已經成團沉澱了。
如果為了快點乾燥rna，可以在7500g/10min/4℃這個步驟棄上清後再7500g/1min/4℃離心，等管壁殘留的75%乙醇全部到管底後用rnase free的槍頭吸乾，冰上靜置5分鐘就可以加水溶解了。
trizol 法怎麼提取高質量rna
8樓：北京索萊寶科技****
rna的提取（僅供參考）
準備試劑：氯仿，異丙醇，75℅乙醇，無rnase的水或0.5℅sds(溶液均需用depc處理過的水配製)
操作步驟：
1. 勻漿處理:
a. 組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml trizol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過trizol體積10℅。
b. 單層培養細胞 直接在培養板中加入trizol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。
trizol的用量應根據培養板面積而定，不取決於細胞數。trizol加量不足可能導致提取的rna有dna汙染。
c. 細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml trizol，反覆吸打。加trizol之前不要洗滌細胞以免mrna降解。
一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2. 將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白複合物完全分離。
3. 可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可於2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。
離心得到的沉澱中包括細胞外膜，多糖，高分子量dna，上清中含有rna。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
4. 每使用1ml trizol加入0.2ml氯仿，劇烈振盪15秒，室溫放置3分鐘。
5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一箇中間層。rna主要在水相中，水相體積約為所用trizol試劑的60℅。
6. 把水相轉移到新管中，如要分離dna和蛋白質可保留有機相，進一步操作見後。用異丙醇沉澱水相中的rna。
每使用1ml trizol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
7. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出rna沉澱，離心後在管側和管底出現膠狀沉澱。移去上清。
8. 用75℅乙醇洗滌rna沉澱。每使用1ml trizol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鐘，棄上清。
9. 室溫放置乾燥或真空抽乾rna沉澱，大約晾5-10分鐘即可.不要真空離心乾燥，過於乾燥會導致rna的溶解性大大降低。
加入25-200μl無rnase的水或0.5℅sds,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鐘使rna溶解.如rna用於酶切反應,勿使用sds溶液。
rna也可用100℅的去離子甲醯胺溶解，-70℃儲存。
注意事項：
1. 從少量樣品（1-10mg組織或102-104細胞）中提取rna時可加入少許糖原以促進rna沉澱。例如加800ml trizol勻漿樣品，沉澱rna前加5-10μg rnase-free糖原。
糖原會與rna一同沉澱出來，糖原濃度不高於4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響pcr反應。
2. 勻漿後加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃儲存至少一個月。rna沉澱可以儲存於75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3. 分層和rna沉澱時也可使用臺式離心機，2600×g離心30-60分鐘。
請教老師喜用神，請教老師八字喜用神
出生農曆 庚辰年 十一月 三十日 巳時。生辰八字 庚辰 戊子 丁巳 乙巳 格局 七殺格 急躁好勝，具俠義心，略帶野性，勇敢果決。魄力十足，膽氣過人。日主失時，故身稍弱。異黨中食傷較強，建議以同黨的印星為用神，比劫次之。喜 木 印星 火 比劫 忌 土 食傷 金 財星 八字喜木 有利的方位是東方，不利西...
請教 裝寬頻，哪家好，請教各位，家庭用什麼寬頻最好
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請教此喜忌用神及格局，請教此八字喜忌用神及格局
辛金日元嘛，不喜歡土的，最怕土厚埋金閃光不了的。辛金生於冬月得水洗淘內而清，容但太寒喜歡丁火溫暖的，喜丁用甲，丙辛合化，使丙火不焚甲木，有相生之象，這很好了。格局呀？不成什麼格局的，喜丁用甲，月令子水食神不為所用，有些遺憾了！不然是才女，該走藝術之路才對頭的，但這命雖有才藝，但發揮不佳的，為啥呢？時...