1樓：句月聽風
先看錶達載體有哪些合適的酶切位點，比如ndei,ncoi這樣識別序列有atg起始密碼子的，再看看目的基因含不含有這些位點，含有就不好連線了，挑好位點，計算下讀碼框是否正確，保證核糖體結合位點後的第一個atg與目的基因是間隔3的倍數個鹼基。下游的位點更好選，如果有6xhis標籤，想融合表達的話，就注意下要是同一讀碼框，同時利用載體的終止密碼子，如果沒有這樣的需要，就利用目的基因本身的終止密碼子好了。基本是這樣，具體還是看看書吧。
將目的基因構建在表達載體上的方法有哪些
2樓：匿名使用者
有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切，然後連線到酶切過的表達載體上。第二種是先把pcr產物連到過度載體上，再從過度載體搶切下目的基因，最後再連線到酶切過的表達載體上。
在上述實驗中,為了防止目的基因和質粒表達載體
3樓：匿名使用者
一般情況下，我copy們會用同一種限制酶分別切割目的基因和質粒，使其擁有相同的黏性末端，然後再用同一種dna連線酶使其結合在一起。
本題中想考察的是在這個過程中可能存在的一種錯誤情況，因為我們假如用同一種限制酶切割的話，我們是期待目的基因和質粒的粘性末端在連線酶的作用下能連線在一起從而形成重組質粒，但是由於目的基因兩端的粘性末端鹼基彼此互補、質粒兩側的粘性末端也彼此互補，在對應的連線酶的作用下它們有可能自身發生環化，形成兩個環狀的dna而不是一個重組質粒，因此我們最好的方法是用兩種不同的限制酶分別切割目的基因和質粒的兩側，使它們各自的兩端彼此不互補，那麼再用連線酶連線的時候，就不會出現自身環化的情況，而是按我們計劃的那樣去構建重組質粒了。
你明白了嗎？
4樓：冷夢天魂
防止意外連線就是防止載體之間相互連線，而啟動子和終止子是要儲存的，所以酶切是應該選用括ecorⅰ、bamhⅰ兩種酶同時切。
基因表達載體和重組質粒的區別
5樓：匿名使用者
基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。
將目的基因與運載體結合的過程，實際上是不同**的dna重新組合的過程。如果以質粒作為運載體，
首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。然後用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組dna分子。
這個重組的dna分子也叫重組質粒。
就是這樣。簡單的說，重組質粒是基因表達載體的一種。
表達載體和克隆載體有什麼不同?
6樓：醉意撩人殤
表達載體和克隆載體的區別：
1、性質不同
表達載體：生物學中，基因工程的基本操作，表達載體(expression vectors)就是在克隆載體基本骨架的基礎上增加表達元件(如啟動子、rbs、終止子等)，使目的基因能夠表達的載體。
克隆載體：克隆載體通常採用從病毒、質粒或高等生物細胞中獲取的dna作為克隆載體，在載體上插入合適大小的 外源dn**段，並注意不能破壞載體的自我複製性質。
2、組成不同
表達載體：表達載體四部分：目的基因、啟動子、終止子、標記基因。
克隆載體：常見的載體有質粒、噬菌粒、酵母人工染色體。
7樓：
克隆載體是在克隆過程中用到的各種質粒，比如為了擴增目的基因的高拷貝質粒、為了方便測序的測序質粒、為了連線pcr產物的ta質粒、為了重組的穿梭質粒等等。克隆載體一般有較強的複製能力，利於基因的儲存和擴增，而且提供豐富的酶切位點等等。它不必有強啟動子，因為不重於表達。
表達載體是基因克隆結束後，為了在特定細胞內表達而構建的。他重點在於表達，有各種各樣的啟動子適應於不同種類的細胞，並且有各種各樣，如誘導等可控的表達調控方式。
8樓：匿名使用者
表達載體是用來表達該載體上的某某基因而設計的載體；克隆載體是用來克隆該載體上的某某基因而設計的載體。
9樓：鈕風忻方雅
克隆載體一般是原核細菌
將需要克隆的基因與克隆載體的質粒相連線
在匯入原核細菌內
質粒會在原核細菌內大量複製
形成大量的基因克隆
被克隆的基因不一定會表達
但一定被大量複製
而表達載體是一些用於工程生產的細菌
他們被匯入目標基因
這些目標基因會在此類細菌中得到表達
生產出我們需要的產物
匯入的基因是有克隆載體產出的
構建基因表達載體時,必須用什麼處理目的基因和受體細胞 10
10樓：天藍色心
你好，構建表達載體時必須用相同的限制性核酸內切酶處理目的基因和運載體，使他們擁有共同的黏性末端，從而可以連線在一起，匯入受體細胞的時候根據受體細胞種類的不同方法不同，如果說處理的話，應該指的是匯入微生物細胞，應該用ca＋處理受體細胞，使其變成能自主吸收周圍dna的狀態，此細胞也稱之為感受態細胞
克隆載體與基因片段重組，與表達載體與基因片段重組，最後匯入動物體內，哪個更好呢
克隆載體主要是用來進行dna的重組 目的基因的分離和純化等等。而表達載體主要是進行目標基因的真核或者原核表達。兩種載體的用途不同各有優勢，如果你想要做蛋白的表達，那麼就選用表達載體比較好。克隆載體只是為了分離得到某個基因，表達載體是為了目的基因表達，各有實驗目的，用途不同，所以無法比較 您好，我還有...
構建基因表達載體時如何保證目的基因插入位置在啟動子與終止子之
你插入基因是需要用酶連作用的，載體質粒在設計的時候有多酶切位點，這個位點已經就是在啟動子和終止子之間的 通過選用相同且恰能分割啟動子和終止子的限制性核酸內切酶 即限制酶 作用於載體基因和目的基因。通過選用合適的限制性核酸內切酶 即限制酶 來使切割點在啟動子和終止子之間。構建基因表達載體啟動子和終止子...
外源性基因與載體的連線方式有哪些
首先是t,a連線 復,就是現在通常制使用的t載體,一般的pcr產物都在兩端加個a,這樣t,a相配,t4連線酶可以把他們連在一起.第二,粘性酶切位點連線,把載體和外源基因用相同的酶進行酶切 雙酶切,或者單酶切都可以 相應的片段,用酶切出來的粘性末端進行配對,t4連線酶進行連線.第三,平末端連線,也是用...