做pcr時出現假陽性,假陰性是怎麼回事

2021-04-19 20:30:45 字數 1014 閱讀 3844

1樓:█重量█筻昗

造成pcr假陰性的原因是複雜的,也是多樣的。主要有: 1.

pcr儀本身的質量問題。pcr儀設計原理上的差異和經常出現的質量問題(如:溫控不準等)給臨床帶來了諸如非特異性擴增(假陽性)、擴增效率下降(假陰性)等問題.

2.離心機問題。離心機的質量或使用不正確,造成離心標本模板沒有分離出來造成假陰性,竊以為這是最易被忽視的問題。

其時離心機使用問題不僅在pcr,在整個檢驗工作中都是最易被忽視的問題,只是因為在其他工作中不象pcr那樣明顯影響檢測結果罷了。 生物幫上面有這方面的介紹, http://www.

提取分離,, mrna提取, mirna提取, 總rna提取, mrna分離, 分離mrna, rna提取原理。

pcr出現假陰性假陽性和pcr儀的溫度控制精度有多大關係。

2樓:匿名使用者

如果引物設計的特

異性好,模板沒有什麼特殊結構,基本上溫度上有0.5c~1c左右的變化,專在結果屬上基本沒有反應。

只有引物有非特異結合,或者是模板結構難於變性擴增,或者是模板質量不好,溫度的變化才有可能造成變化。

假陽性更多是來自於整個反應體系的汙染,體系中任何一個環節汙染了,都有可能看到陽性結果,但實際上並沒有目標片段的擴增。而另外一種假陽性就是引物非特異結合,導致非特異擴增。不過還是第一種情況更常見。

假陰性會和引物、模板質量相關,同時受到溫度影響相對較大。引物結合模板能力弱,模板質量差,或者模板結構複雜,不易擴增,會造成假陰性。還有可能是退火溫度太高,引物無法與模板結合,這種情況下降低退火溫度可以幫助消除假陰性。

但是如果單純考慮溫度精度,我個人覺得除非用裝置檢測確實出現比較大的溫度變化,否則真正造成這種有或無的情況還是少數,很難說是決定因素。可以用一個肯定可以擴增出來的模板做陽性對照檢測,或者請廠家提供儀器的檢測。

3樓:正能

這個感覺不大啊 那要和你的引物特異性的好壞有關

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