1樓：歐陽俠
原理其實很簡單：
1、抗體是可溶的（這個沒問題吧？）
2、抗原
分為可溶性抗原和顆回粒性抗原，顆粒性抗原指答的就是像細菌、紅細胞這樣的顆粒，它們的凝集表現為凝塊。而可溶性抗原（比如毒素、多糖等）與抗體反應，則表現為沉澱或渾濁，需要數分鐘或數小時才能完成。
雙向瓊脂擴散實驗使用的就是可溶性抗原與抗體反應，形成的是沉澱，隨著抗原抗體量的多少，在擴散最恰當比例的位置形成沉澱線。
雙向瓊脂擴散實驗怎樣分析抗原抗體的純度
2樓：匿名使用者
抗原抗體結合會形成沉澱線,沉澱線的形成是根據抗原抗體兩者比例所致,沉澱線靠近抗原孔,則提示抗體含量大;靠近抗體孔,則提示抗原含量較多.
不出現沉澱線則表明抗體或抗原的缺乏或抗原過剩.
另外,如出現多條沉澱線,則說明抗原和抗體皆不是單一的成分.因此,可用於鑑定抗原或抗體的純度.
在雙向瓊脂擴散試驗中，為什麼抗原抗體要選擇適當比例
3樓：春素小皙化妝品
當兩者在最適當比例處相遇時，即形成一條清晰的沉澱線。根據有否出現沉澱線，可用已知的抗體鑑定未知的抗原，或用已知的抗原鑑定未知的抗體。
沉澱線靠近抗原孔，則提示抗體含量大；靠近抗體孔，則提示抗原含量較多；不出現沉澱線則表明抗體或抗原的缺乏或抗原過剩；另外，如出現多條沉澱線,則說明抗原和抗體皆不是單一的成分。因此，可用於鑑定抗原或抗體的純度。
擴充套件資料
抗體效價的滴定雙向擴散試驗是抗血清抗體效價滴定的常規方法。固定抗原的濃度，稀釋抗體；或者抗原和抗體雙方皆作不同的稀釋，經過自由擴散，形成沉澱線，以出現沉澱線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價。
抗原或抗體純度鑑定用混合抗原或抗體鑑定抗體或抗原，出現一條沉澱線說明待測抗原或抗體純，出現多條沉澱線說明不純。
雙向擴散試驗簡單易行，用途廣泛，但該技術靈敏度低，出現結果慢，不能精確定量，這些弱點在相當程度上限制了它的應用。
4樓：聽風
這是為了便於觀察，以便得出科學的結論。
雙向瓊脂擴散試驗常用於定性檢測，也可用於半定量檢測。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內，讓它們相互向對方擴散。當兩者在最適當比例處相遇時，即形成一條清晰的沉澱線。
根據有否出現沉澱線，可用已知的抗體鑑定未知的抗原，或用已知的抗原鑑定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原發性肝癌的早期輔助診斷。
沉澱線靠近抗原孔，則提示抗體含量大;靠近抗體孔，則提示抗原含量較多;不出現沉澱線則表明抗體或抗原的缺乏或抗原過剩;另外，如出現多條沉澱線,則說明抗原和抗體皆不是單一的成分。因此，可用於鑑定抗原或抗體的純度。
雙向瓊脂擴散實驗能幹什麼
5樓：櫻花茶道
常用於定性檢測，也可用於半定量檢測。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內，讓它們相互向對方擴散。當兩者在最適當比例處相遇時，即形成一條清晰的沉澱線。
根據有否出現沉澱線，可用已知的抗體鑑定未知的抗原，或用已知的抗原鑑定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原發性肝癌的早期輔助診斷。 甲種胎兒蛋白（α-fetal protein, afp），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。
胎兒在第9周才出現此種蛋白，13~19周達高峰，到21周後逐漸下降，胎兒出生後該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗方法檢查不出，而肝癌病人及個別卵巢癌或**癌病人的血清檢出有此種蛋白。 可溶性抗原（如蛋白質、多糖、脂多糖、病毒的可溶性抗原、結合蛋白等）與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。 抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間後，在抗原、抗體孔之間出現清晰緻密的白色沉澱線。
每一抗原與其相對應抗體只能形成一條沉澱線，若同時含有若干對抗原抗體系統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉澱線。且根據沉澱線融合情況，還可鑑定兩種抗原是完全相同還是部分相同。所以，可用此法來分析和鑑定標本中多種抗原或抗體成份，並用以測定抗原或抗體的效價。
請教做瓊脂擴散實驗的方法？
6樓：匿名使用者
瓊脂擴散試驗（gel diffusion test）
可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本型別有單向擴散和雙向擴散兩種。
（一）雙向瓊脂擴散試驗（double immunodiffusion test）
抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間後，在抗原、抗體孔之間出現清晰緻密的白色沉澱線。每一抗原與其相對應抗體只能形成一條沉澱線，若同時含有若干對抗原抗體系統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉澱線。且根據沉澱線融合情況，還可鑑定兩種抗原是完全相同還是部分相同。
所以，可用此法來分析和鑑定標本中多種抗原或抗體成份，並用以測定抗原或抗體的效價。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精製瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器（直徑3mm）、溼盒、吸管等。
【方法】
1、用生理鹽水配製1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁熱澆於載玻片上，製成瓊脂板。
2、待瓊脂凝固後，按右圖用打 孔器打孔，並用針頭挑去孔中瓊脂 （孔距為5mm）。
3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢位。
4、將加好樣品的瓊脂板置於溼盒內，於37℃溫箱內放置24小時後觀察結果。
【結果】
觀察孔間沉澱線的數目與特徵，一般可注意到以下幾種現象：
1、抗原與抗體孔間形成一條沉澱線，說明只有一種抗原與相對應的抗體特異性結合，如出現數條沉澱線，說明有幾組不同的抗原和相對應抗體相結合。
2、根據抗原的成份可有以下三種現象：（1）若二孔中的抗原相同，與相應抗體形成的沉澱線融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，當抗血清中分別含有與抗原相應的抗體時，則形成的沉澱線相交叉；（3）若兩孔中抗原部分相同，抗血清中有各相應的抗體，形成的沉澱線相切。
3、相應抗原抗體所形成的沉澱線，如二者濃度相當，沉澱線在孔**，二者濃度不當時，則沉澱線偏向濃度低的一側
（二）單向瓊脂擴散試驗（single immunodiffusion test）—人血清中igg、iga、igm的測定。
單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗，將抗體混合於瓊脂內，傾注於玻片或平皿上，凝固後在瓊脂上打孔，再將抗原標本加入孔內，經過一定的時間，在孔的周圍出現抗原抗體複合物形成的沉澱環，環的大小與抗原含量和擴散時間相關。用不同濃度的抗原製成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從準標曲線中求出。本試驗主要用於檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量。
材料】igg、iga、igm免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器（10微升）、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。
【方法】
1、免疫瓊脂板製備：將1.5%瓊脂（用ph8.
2、0.05m的巴比妥緩衝液配成），加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清（抗血清最終稀釋度取決於抗血清所標化的稀釋度），混勻，製成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固後打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.
2cm。
2、稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解後使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。
3、加樣：將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內，其餘孔滴加待檢的稀釋血清，每個檢樣加兩個孔，每孔滴加10微升。
4、擴散：將免疫板置水平溼盤內，放進37℃溫箱，igg免疫板擴散24小時，iga、igm板48小時後取出置黑色背景前觀察結果，（如果沉澱環不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小時後觀察），必要時可以染色後觀察。
5、繪製標準曲線及血清標本中igg、iga、igm定量測定：測量沉澱環直徑。沉澱環直徑的大小除與抗原量相關，還與分子量和擴散時間有關。
這種沉澱環直徑與抗原含量的關係不是直線相關，而是對數關係，這種關係有兩種計算方法：
（1）mancini曲線－適用於大分子抗原和長時間擴散（＞48小時）的結果處理。使用方格計算紙劃線，沉澱環直徑的平方與抗原濃度呈線性關係。公式表示：
c／d2 ＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
（2）fehey曲線－適用於小分子抗原和較短時間（24小時）擴散的結果處理。使用半對數紙劃線，濃度的對數與沉澱環之間呈線性關係。公式表示：
logc／d＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
【結果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。
在什麼情況下利用雙向免疫擴散檢測疾病
肝病 某些型別的心臟病等利用雙向免疫擴散檢測疾病。雙向免疫擴散與單向免疫擴散的區別？雙向免疫擴散是指可溶性抗原與相應抗體在瓊脂介質中相互擴散,彼此相遇後形成一定型別的特異性沉澱線。沉澱線的特徵與位置不僅取決於抗原抗體的特異性及相互間比例，而且與其分子大小及擴散速度相關。當抗原 抗體存在多個系統時，可...
瓊脂是什麼
瓊脂，學名瓊膠，又名洋菜 海東菜 凍粉 瓊膠 石花膠 燕菜精 洋粉 寒天 大菜絲，是植物膠的一種，常用海產的麒麟菜 石花菜 江蘺等製成，為無色 無固定形狀的固體，溶於熱水。在食品工業中應用廣泛，亦常用作細菌培養基。它在食品工業 醫藥工業 日用化工 生物工程等許多方面有著廣泛的應用，瓊脂用於食品中能明...
擴散板的二,擴散原理
理論基礎copy 當光從一種介bai質射到另一種介質的平滑介面du時,一部分光被介面反射,zhi另一部分光透過dao介面在另一種介質中折射。光的入射角等於反射角,且反射光與入射光在同一平面中法線的兩側,這就是反射定律。而折射光線則符合折射定律 折射光線位於入射光與法線的平面內,折射光與入射光在法線兩...