1樓：匿名使用者
恩 就是質粒 感受態的大腸桿菌 把t載體轉進去 然後搖菌培養 這樣載體就會隨著菌的擴增而擴增 然後就可以提質粒拿去測序或者別的後續實驗 因為連線完的載體濃度是很小的
我的目的片段連t載體後轉化，提質粒，但是提出來的東西和我的目的片段差不多大,這是什麼原因？
2樓：匿名使用者
質粒有超螺旋，環狀還有複製不完全三種，可能會同時存在於大腸桿菌中專，所以你所提出來的質粒屬直接電泳時無法判斷分子量的，如果想看看是否插入成功，你可以將你的片段酶切下來再進行電泳，來證明是否有插入，才比較可行
t載體是質粒載體嗎
3樓：aoi聖誕三
pcr產物一般和 t載體相連，t載體是一種線性載體，和你的目的片段連線以後，就變成了 圓形的質粒。 t載體的種類很多，takara的書上有很多介紹。
我的目的片段連t載體後，挑單克隆搖菌，用菌液pcr能p出目的片段，再提質粒用ecor1做酶切，片段變小怎麼回
4樓：南霧嶺後
片段變小？
你的目的片段裡有沒有這個酶切位點？你的目的片段有多大？
建議用雙酶切，將片段切出後電泳，如果有該片段，在電泳時就一目瞭然了。
5樓：匿名使用者
不會有兩個ecori酶切位點吧，正好酶切下一小段片段下來……
6樓：還月月
你要看看你的質粒上是不是有兩個酶切位點那樣的話就會切下一小部分，由於鹼基很少，所以電泳效果是看不出來的
最近遇到目的片段與t載體進行連線，目的片段近2000bp，是不是太長了，連線效率會降低，有沒有什麼好辦法？
7樓：匿名使用者
你確定p出來了？ 這個和長度沒有多大關係的 做了幾次呢
t載體的作用是什麼？克隆時為什麼要用t載體？
8樓：匿名使用者
我做過幾個克隆，沒用過t載體，直接將酶切後純化的產物進行連線，照樣可以連線成功，基本上都會有10-50個克隆長出來。我用的是sal i和nde i這兩個酶切位點，似乎這兩個都是平端的哦。
9樓：響馬飛騎
t載體又叫t質粒載體，是指t4噬菌體dna連線酶，作用是在有mg2 、atp存在的連線緩衝系統中，將分別經酶切的載體分子與外源dna分子進行連線。
dna連線酶有兩種：t4噬菌體dna連線酶和大腸桿菌dna連線酶。兩種dna連線酶都有將兩個帶有相同粘性末端的dna分子連在一起的功能，而且t4噬菌體dna連線酶還有一種大腸桿菌dna連線酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈dna分子連線起來。
t4噬菌體dna 連線酶催化dna 連線反應分為3 步：首先，t4 dna 連線酶與輔因子atp形成酶-atp複合物；然後，酶-atp複合物再結合到具有5』磷酸基和3』羥基切口的dna上，使dna腺苷化；最後產生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。連線反應通常將兩個不同大小的片斷相連。
形象的說，dna水解酶相當於剪刀，剪斷dna，而t載體（dna連線酶）就相當於針線。如果克隆時不用，就不能將dna連線起來。
在生工測序連線有t載體的質粒 怎麼看哪一部分是目的片段
10樓：匿名使用者
找到載體插入位點兩端的序列，中間的就是你的目的片段。t載體一般用於pcr產物的克隆，如果是pcr產物的話，你可以找到你擴增用的引物序列，引物及引物中間的序列就是你要的目的片段
質粒連線目的片段，菌液pcr後電泳有目的條帶，為什麼送菌液測序結果是空載體呢 ？
11樓：exo不偷井蓋
1、你bai
的實驗目的是什麼？ 2、如果du是克zhi隆，連線t載體後不用酶dao
切，直接轉化菌專落pcr檢測有目屬
的條帶的話送樣測序即可。 3、如果是做表達載體構建，pcr產物和質粒dna酶切後與沒有酶切的在同一塊膠上電泳，如果兩個酶切位點很近，幾乎看不到被切下來的小片段條帶（太小，早就跑出去了）。你要是怕酶切不完全就多稍微加點酶，切的時間長一點。
4、關於酶切產物有幾條帶視酶切效果而定，酶切完全則兩條，一大一小（小的可能看不到，原因見3、）酶切不完全則三條帶，一大一小及未切開的pcr產物；質粒的話可能還多一條環狀分子和線狀分子的區別。
12樓：落葉來也
確定有目的條帶麼?
如果確定連上了，可能就是挑菌的時候不是單菌落，重新挑，或者原點再取點，塗布或者劃線。
基因連入t載體後再連入載體2301,步驟是什麼?
13樓：匿名使用者
你的目的基因兩端加了酶切位點麼？或者目的基因轉錄序列的外側有沒有酶切位點？有的話雙酶切再連線。沒有的話建議你設計帶酶切位點的接頭，然後再連到t載體上去。
這樣。你先把含t載體的菌搖起來，提質粒，雙酶切，割膠**酶切片段（小的那一段，就是你要的基因）。2301載體你看看有沒有那兩個酶切位點，同尾酶也可以，雙酶切，**切開的載體。
然後把載體和基因片段連線，轉化感受態細菌，挑平板，就行了。不要用菌液，要用提出的質粒！酶切體系你購買酶的時候會告訴你的。
14樓：浙大阿米巴
請說清楚，不是每個人都在從事和你一樣的工作。
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