1樓：匿名使用者
western blot檢測的結果與理論計算值有差異是非常正常的事情
western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情況的定性。而目的蛋白檢測的大小取決於目的蛋白在sds-page的結果，也就是說如果目的蛋白在sds-page上檢測結果是偏大的，那麼在western blot轉膜後也會是偏大的，這和目的蛋白的結構（糖基化修飾），，組成等等都有關係。所以只是一個相對的分子量的結果。
要精確檢測目的蛋白的分子量結果需要做（）檢測
為什麼western blot band條帶的大小和**的分子量大小不同?
2樓：雛莓
但即使是這樣，western blot得到的條帶大小依然會和預計的分子量大小有出入。大部分常見的原因如下：1.
翻譯後修飾—比如蛋白的磷酸化，糖基化等，這些都會增加蛋白的分子量大小。2.翻譯後剪下—比如很多蛋白首先被合成為前體形式，然後通過剪下獲得生物學活性，比如pro-caspases。
3.剪接變異體—相同的基因，經過選擇性剪接會產生不同分子量大小的蛋白。4.
相對電荷—氨基酸的組成 (帶點 vs 不帶電) 5.多聚體—比如蛋白二聚體。
為什麼同一種蛋白不同抗體標記的分子量大小不同
3樓：
這是你轉膜的時候，膜和膠之間沒有很好的貼合而導致的空泡。
轉膜時一定要把膜和膠良好貼合才可以，有一個訣竅是在轉膜緩衝液中浸泡著貼合，雖然費點緩衝液，但幾乎不會出現空泡現象了。
如果你用半乾轉的話，建議你換成溼轉法，也可以降低這個問題出現的概率。
為什麼western blot結果中，蛋白質檢測分子量會與計算大小不同
4樓：匿名使用者
western blot檢測分子量的結果與理論計算值有差異是非常正常的
事情western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情況的定性。而目的蛋白檢測分子量的大小取決於目的蛋白在sds-page的結果，也就是說如果目的蛋白在sds-page上檢測結果是分子量偏大的，那麼在western blot轉膜後也會是偏大的，這和目的蛋白的結構（糖基化修飾），電泳遷移率，緩衝液組成等等都有關係。所以只是一個相對的分子量的結果。
要精確檢測目的蛋白的分子量結果需要做質譜（ms）檢測
為什麼同樣的蛋白在兩次western blot檢測中蛋白量相差那麼大啊?
5樓：匿名使用者
個人認為：
1 加樣量的變化
2 一抗 二抗的濃度變化 以及其洗脫時間的影響3 **時間（影響最大）
6樓：裝置和備件
影響的因素很多，難以判斷
western blot，因為目的蛋白與β-actin分子量差不多，先對目的蛋白做顯色反應，再對β-actin做顯色反應。
7樓：匿名使用者
如果樣品足夠多，就多跑幾個同樣的泳道，轉膜後，把膜裁開，封閉，孵育到不同的抗體中。分別可以檢測。
如果要在統一泳道中檢測，就必須要做剝離，否則結果沒法說明了。常用配方如下
stripping solution: 100 mm 2-mercaptoethanol, 2% (w/v) sds, 62.5 mm tris-hcl, ph 6.7
phosphate buffered saline (pbs): 10 mm sodium phosphate, ph 7.2, 0.9% (w/v) nacl
在網上很容易找到相應的資訊，在50-65c孵育一段時間來實現剝脫。不過由於有sds，很可能會造成部分抗原的剝脫。
通常用化學發光的很好剝，用顯色的就比較困難了，熒光的也不太好剝。
如果擔心自己配的不穩定，就去買市售的striping buffer就可以了。
8樓：
只要蛋白未講解，都可以做western blot。
做了目的蛋白後再做beta-actin時，需要洗膜，市面上有專門的膜再生液，你也可以直接用tbst洗滌，適當加大tween20的濃度。
9樓：黑皮地雷
用strip液洗就可以了，洗完之後重新封閉，孵育actin一抗
strip液可以自己配，也可以直接買成品
蛋白中一個分子量就是一個蛋白嗎
10樓：匿名使用者
首先進ncbi的主頁，主頁半年前改版了現在更人性化。在搜尋框（很大的那個）裡面輸入要搜尋的內容，比如你的『e.coli bl21 dna ligase 』，搜尋框上面有個search選項，下拉選單選擇「protein」，點search，搜尋會返回一個結果，就是你那個蛋白的資訊了。
chain a, last stop on the road to repair: structure of e.coli dna ligase bound to nicked dna-adenylate
資訊全在下面，最後那個是蛋白質序列，相對分子量就可以用別的計算方法算出來了。如果這個蛋白有人做了晶體結構，會在右邊顯示，很方便。
請問做western blot技術跑蛋白epcr的分子量是多少
11樓：匿名使用者
1. western blot每孔上樣總量15-50ug大部分蛋白能做出來，跟蛋白質表達量、分子量、抗體效價都密切相關。 2.
組織一般取200mg，勻漿後蛋白常能得到幾百ug，跑十塊膠足夠。
如何用western blot方法從細胞培養上清中檢測目的蛋白
12樓：
western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。
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