1樓：匿名使用者
是4度吧。。放4度是抑制其生長。。若放在-20度，雖然經過轉化後復甦，細胞是有些恢復了活性，但是畢竟還是很脆弱，-20度冷凍細胞，然後再解凍使用的話，很容易使細胞死亡的，加之如果本來細胞的轉化效率就不是很高的話，可能再次塗板的結果是沒有菌落長出。。。
一般，我們做實驗，剩餘對的菌液是不會再用的，一是不靠譜，二是若是塗的板沒長單菌落的話，那麼這個剩餘的菌液也就沒什麼作用了：若是長出了，大可以抽提質粒，下次用時再轉，或者搖菌後用甘油保種，下次用時可選擇劃線，也可以直接搖菌。。。
個人感覺那個剩餘的菌液，不存也罷。。不知道你那邊存起來時為了？？？
2樓：匿名使用者
為什麼要儲存？都塗上不就完了，如果轉化率較高，不必用離心，吸取200微升塗上就行了，轉化率低的時候離一下心倒掉上清留一兩百微升塗板。一般4度短時間儲存，-20度長期儲存。
菌液反覆凍融會影響菌種活力。如果一兩天內就要用還是放4度好。
感受態細胞為什麼要放倒-80度儲存
3樓：匿名使用者
康體生命的感受態細胞都是-80度儲存的，dh5α，dh10β，stbl3，jm109，bl21(de3)，top10這些都是包乾冰、包運送的，平均下來一支只要3.5
感受態細菌攝取顏色體會不會啟用
4樓：匿名使用者
不同細菌感受態製備方式相同方法一：細菌轉化的方法多以mendel和higa（1970）的發現為基礎，其基本方法是用冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。
本法適用於大多數大腸桿菌菌株，且迅速、重複性好。操作過程簡述如下。1．從37℃培養16～20h的新鮮平板中挑取一個單菌落（如大腸桿菌dh52），或1ml新鮮的16～20h過夜培養物，轉到一個含有100mllb培養基的1l或500ml燒瓶中。
於37℃劇烈振搖培養約2～3h（旋轉搖床200～300r/min），每隔20～30min測量od600值≈0.4。2．在無菌條件下將細菌轉移到一個，用冰預冷的50ml聚丙烯離心管中，在冰上放置10～20min。
3．於4℃用sorvallgs2轉頭（或與其離心管相配的轉頭）以4000r/min離心10min，以**細胞。4．倒數培養液，將管倒置1min以使最後殘留的痕量培養液流盡。5．以10ml用冰預冷的0.
1mmcacl2重懸每份沉澱，放於冰上。6．於4℃用sorvallgs3轉頭（或與其相應的轉頭）以4000r/min離心10min，以**細胞。7．倒出培養液，將管倒置1min以使最後殘留的痕量培養液流盡。
8．每50ml初始培養物用2ml冰預冷的0.1mcacl2重懸每份沉定，此時，可以迅速將細胞分裝成小份，液氮中冰凍，-70℃貯存備用。9．用冷卻的無菌吸頭從每種感受態細胞懸液中各取200μl轉移到無菌的微量離心管中，每管加dna或連線反應混合物（體積≤10μl，dna≤50ng），輕輕旋轉以混勻內容物，在冰中放置30min。
10．將離心管放到預加溫到40℃的迴圈水浴中的試管架上，放置90s～2min，不要搖動試管。11．快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻1～2min。12．每離心管加800μlsoc培養基，用水浴將培養基加溫到37℃，然後將管轉移到37℃搖床上，溫育45min使細菌復甦，並且表達質粒編碼的抗生素抗性標記基因。
13．將適當體積（每個90mm平板可達200μl）已轉化的感受態細胞轉移到含200mmol/lmgso4和相應抗生素的sob培養基上。14．將平板置於室溫至液體被吸收。15．倒置平皿，於37℃培養，12～16h後可出現菌落。
方法二：cassuperone-step***petentcellprepskit採用一種簡單便捷的方法處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，便於質粒dna的轉化，可滿足一般實驗的要求。與cacl2法相比具有多種優點：
使用方便，只需一步即可完成感受態細胞的製備；轉化效率略高於cacl2法，一般可達106-108cfu/μg，滿足一般實驗需要；感受態細胞製成後即可儲存於-70℃,無須加入甘油，並且經長期儲存活力無明顯下降。準備工作：1．從液氮或低溫冰箱中取出的大腸桿菌凍存菌，在lb平板上劃線，37度過夜至長出單菌落。
挑形態飽滿的單菌落2個，分別接種5mllb培養基中，37℃，250rpm，過夜培養。2．次日從5mllb培養物吸取200μl轉入50mllb培養基中（250ml錐形瓶），37℃，250rpm培養2小時，此時od600約0.4—0.
5。感受態細胞的製備：3．吸取1ml菌液到1.
5ml離心管裡，5000rpm離心5分鐘，棄去上清。4．加入100μl預冷的solutiona，懸浮菌體，冰浴30分鐘。5．此時感受態細胞已經制成可立即使用或-70℃儲存。
細胞轉化：6．在感受態細胞中加入100pg-10ngdna，混勻，冰浴30分鐘，然後42℃1分鐘熱擊，再次冰浴2分鐘。加入0.
9mllb培養基，20μlsolutionb，37℃，振盪培養1小時。7．取適當菌液（100-200μl）塗布相應抗性的平板。8．過夜培養約16個小時，數菌落數，計算轉化率。
補充說明：1．所用器具一定要清潔；2．操作步驟2中培養基的裝量也是很重要的，建議裝量不要高於此值：500ml錐形瓶裝100ml培養基，250ml錐形瓶裝50ml培養基；3．在收穫菌體前半小時還可以在培養基中加入20mm的mgcl2，效果會更好一些；4．為保證細胞處於對數生長期，培養後的菌體的od值不要高於0.
6；5．製備感受態細胞時所有操作儘量保證在冰上操作；6．細胞轉化操作步驟6中也可以不必進行熱擊，冰浴後直接加入新鮮lb，簡化操作步驟，但轉化效率低於熱擊方法，適用於對轉化率要求不高的實驗。方法三：1、取1%大腸桿菌e.
coli接種於含2mllb培養基的試管中，37℃振盪培養過夜2、取0.1ml過夜培養物轉種於含10mllb培養基的三角瓶中，37℃振盪培養3h至od600=0.3ml離心管中，冰浴10min。
4、在4℃下以4000rpm離心5min，去上清液5、把菌體懸浮於15m1冰冷的0.1mcacl2溶液中，置冰上30min6、然後再在4℃下以4000rpm離心10min，去上清液7、將菌體懸浮於0.1mlcacl2溶液中，冰浴放置4-12hr備用。
方法四：（1）將1ml過夜培養的細菌（如dh52、tg1、tm101）接種於100ml2×yt培養於500ml燒瓶。於37℃刷烈振盪，通常≥200rpm培養的細菌密度約od550=0.
2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。（2）將培養物放於冰上致冷10min，於4℃離心細菌培養物，10000rpm離心10min。
（3）棄除上清，將細菌懸浮於原始培養體積的一半（約50ml）的50mmcacl2和10mmtris·hcl（ph8.0）無菌冷凍液體中。（4）將細菌懸浮放在冰上約5min，然後將懸浮物於4℃10000/rpm離心10min。
（5）棄上清，懸浮細菌於原始培養體積的1/15的50mmcacl和10mmtris·hcl（ph8.0）無菌冷凍中。此時的細胞是感受態細胞，即可用於轉化。
200μl分裝於無菌的1.5ml微量離心管中，貯存於-80℃冰箱中。方法五：
tsb法（也是本人熱衷的方法）1.藥品製備1mmg2+(1mmgso4和1mmgcl2等體積混合)，用0.22um濾膜超濾除菌。
tsb液（30ml/80ml菌液）（現配現用）：peg33503gtryptone0.3gyeastextract0.
15gnacl0.3g2.步驟：
（1）活化菌株（2）挑單菌落培養於5ml的液笨培養基中（3）取液體培養物50ul於80ml的液體培養基中進行擴大培養（4）370c培養3－4小時，od600在0.4－0.6（5）離心，去上清（6）加入20mltsb，重懸（7）離心，去上清（8）加入10mltsb，再加入15－20%的甘油，分裝儲存注，整個操作過程均應在冰上進行。
所用藥品均需滅菌。轉化程式（1）取出200μl感受態細胞慢慢使其溶化，並立即放於冰上，加入dna或連線反應混合物，dna量通常≤50mg。用手指彈打試管10次，使之混勻，然後放在冰上40～45min。
（2）將管放於42℃水浴中2min。（3）然後每管直接加入1.0ml2×yt培養基，倒置混勻，並於37℃培養8～12h，幹浴或水浴，不需振搖。
此期間使細菌生長並開始表達抗菌素。（4）每200μl轉化混合物分別於6個2×yt瓊脂培養板上補充相應抗生素，並含有x-gal（20mg/ml）、iptg（200mg/ml）。
感受態細菌轉化後在氨苄板上培養12個小時,板上長出菌了，挑菌後搖菌
5樓：愛小腿子
實驗結果不能肯定的說明結果是成功的，做實驗的陰性對照也很重要，陰性對照必須做出陰性結果。如樓下的網友所說，可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧：
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」，那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定？如果你沒有做菌落pcr的鑑定，還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠，導致長出了菌，這個菌到底含不含有你的目的質粒，要做pcr鑑定，不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高，同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果，從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
載體與插入片段連線好後 進入宿主細胞轉化 這個時候已經有了一次轉化 為什麼到後面又要轉化呢？
6樓：匿名使用者
puc19是個正control，就是一定會出clone的，如果沒有，就是操作步驟有問題
看你的protocol就是重複做一遍
這樣的話還不如一起做
塗板以後直接放37度啊
補充：根據你的說法，從「連線產物」裡面選，puc19是正control了，你挑克隆只會挑到跟原來一樣的，沒有用的
ps：「連線產物」那也是個質粒
為了提高感受態細胞的轉化率,實驗中需要考慮哪些因素
影響感受態細胞bai轉化du效率的因素及zhi實際操作過程中應注意的事dao項 1.細菌的內生長狀態 實驗中應容密切注視細菌的生長狀態和密度,儘量使用對數生長期的細胞 一般通過檢測od600來控制。dh5 菌株 od600為 0.5 時細胞密度是 5 107 ml 2.所有操作均應在無菌條件和冰上進...
農桿菌感受態細胞用什麼方法進行製備
1.挑取bai少許農桿菌lba4404，接種於du5ml lb液體培養基 含50mg l str 中，28 zhi200r mim培養dao過夜。內2.取2ml培養物於 容lb液體培養基 含50mg l str 中繼續培養，直至od800 為0.5左右。3.將培養物置冰浴中30min，4 5000r...
同科生物感受態細胞製備速凍後可以存放負20度嗎
如果不具備條件，負20度短時間儲存也可以，但是時間長了細胞內部液化度較高的情況下，細胞會由於流動性的原因造成不可逆損傷。所以長時間儲存的話建議要放於負80攝氏度或者液氮中儲存。感受態細胞製備完成速凍後存放負20可以嗎 感受態細胞製備完成速凍後一般是負 80度或者液氮中凍存 如果不具備條件，負20度短...