1樓：中國農業出版社
所謂生理指標測定就是從蜜源植物生理學的角度，以蜜源植物休眠期枝條為材料，通過蒽酮比色法、凱氏定氮法等測定蜜源植物休眠期可溶性糖、澱粉、總糖、蛋白質、c/n等生理指標，並結合來年蜜源植物花期測定的花蜜含糖量，分析休眠期該植物的營養生理指標與來年開花花蜜含糖量間的關係，同時，結合氣候條件**來年該蜜源植物的開花泌蜜情況。下面，僅以對刺槐生理指標的測定為例，說明該方法的主要內容。
（1）實驗材料。分別在北京香山蜜蜂研究所附近，河北省農科院試驗站附近及大連市勞動公園附近選取樹齡、長勢、生境條件基本一致的刺槐（robinia pseudoacacia l.）各5棵，分別在樹上以阿拉伯數字1～5標記。
在2023年、2023年及2023年12月底分別對處於休眠期的上述3個點的標記刺槐取樣。採集的枝條分別編號裝袋，置於60～75℃烘箱中烘乾，恆重待測。由於受篇幅限制，在此僅以北京地區測得資料為例。
（2）實驗方法
刺槐休眠期生理指標測定：將烘乾後的枝條研磨至碎，35目過篩，棄去粗渣，篩後的粉末為下述實驗之材料。
刺槐枝條內糖與澱粉含量的測定用蒽酮比色法。
實驗步驟：
①取磨碎的刺槐枝條粉末100毫克於10毫升的離心管中，加入10毫升80%乙醇，攪拌均勻後置於80～85℃水浴中保溫30分鐘，冷卻後離心，將上清液倒入小燒杯中，重複一次，保留殘渣。
②將上述提取液置於85℃水浴中使絕大部分酒精蒸發至2～3毫升，用蒸餾水定容至50毫升，然後測定提取液中的糖。
③將上述磨碎組織的殘渣於80℃的烘箱中烘乾，烘乾的殘渣轉至試管中，加入2毫升蒸餾水，置沸水中加熱15分鐘，不時加以攪拌，冷卻後，加2毫升9.2摩爾/升過氯酸，不斷攪拌，持續10分鐘，然後加蒸餾水至約10毫升，進行離心。
④傾出上層液於小燒杯中，加2毫升4.6摩爾/升過氯酸於殘渣中，攪拌10分鐘，加蒸餾水至10毫升，離心，傾出上層液於小燒杯中，定容至50毫升，分析提取液中的澱粉。
⑤配製1×10－6、100×10－6、200×10－6、400×10－6、600×10－6葡萄糖梯度標準液各10毫升，待用。
⑥分別取1、4的待測液1毫升於試管中，加入0.4%蒽酮硫酸試劑6毫升，攪勻，約5分鐘在波長650奈米處用721分光光度計測定光密度。
按同樣方法測定梯度標準液的光密度，並繪製標準曲線。
根據待測液的消光在標準曲線上分別查出其相應的濃度c（×10－6），按下式計算出刺槐枝條中糖與澱粉的含量。
糖（或澱粉）含量（%）＝｛c×500/1000000｝×100%
每個樣本重複測定一次。
刺槐枝條中蛋白質的測定——微量凱氏（micro-kieldahl）定氮法。
樣品中蛋白質含量（克%）＝[（a－b）×0.0100×14×6.25/c×1000]×100式中，a為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數；b為滴定空白用去的鹽酸平均毫升數；c為稱量樣品的克數；0.
0100為鹽酸的摩爾濃度，14為氮的原子量；6.25為係數。
準確稱取0.100克刺槐枝條粉末，加入約4毫升的濃硫酸和約400毫克硫酸銅、硫酸鉀混合物，在紅外消化爐中消化約1小時，消化物轉入凱氏定氮儀中加15毫升40%naoh蒸餾5分鐘，以硼酸吸收放出的氨，再用標準鹽酸滴定。
上述實驗以蒸餾水為對照，整個操作重複一次。
刺槐花期花蜜含糖量的測定：北京地區刺槐花期一般為5月上旬至5月中旬，約一個多星期。我們分別於2023年、2023年和2023年刺槐花期，在測定花蜜含糖量的前一天，用紗網將要測的花朵罩住，以防止花蜜被蜜蜂採集。
每日從上午7時開始，每隔2小時測量一次樣本樹的花蜜，直至下午5時結束。每棵樹每次分別測定30朵花，用定量濾紙吸取花蜜。測完的濾紙分別放入已編好號的試管中待測。
測量工作從開花有蜜時起，直至花瓣由白轉黃，無蜜或幾乎無蜜時為止。
實驗方法：將已編好號的含有花蜜的試管，加入少許蒸餾水，分10次將花蜜洗出，定容於50毫升的容量瓶中，稀釋10倍後待測。
用蒽酮比色測定花蜜中的含糖量。為了便於計算，在下列表中已將30朵花的花蜜含糖量換算成100朵花的花蜜含糖量。
（3）實驗結果
①北京刺槐休眠期各營養指標分析結果見表3、表4。
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表3 北京刺槐枝條休眠期營養含量測定結果
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表3 北京刺槐枝條休眠期營養含量測定結果（續）-1
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表4 北京刺槐枝條休眠期營養含量平均值
從表4 中可以看出，可溶性糖含量 2023年最高，2023年次之，2023年最低；澱粉含量 1996 年最高，1995 年次之，2023年最低；蛋白質含量 1994 年最高，2023年次之，2023年最低；c/n 則 2023年最高，2023年次之，2023年最低。
②北京刺槐花期一天中花蜜濃度隨時間的變化情況見表5及圖55。
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表5 北京刺槐花期不同時間花蜜含糖量平均值
我們可以看出一個趨勢，即早晨花蜜濃度較低，11時以後逐漸升高，17時開始逐漸降低。
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圖55 花蜜含糖量隨時間變化圖
③北京刺槐 1994，1995， 2023年三年間各營養指標間差異顯著性檢驗結果，見表6、表7、表8。
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表6 北京2023年和2023年刺槐各生理指標間差異顯著性檢驗
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表7 北京2023年和2023年刺槐各生理指標差異顯著性檢驗
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表8 北京2023年和2023年刺槐各生理指標差異顯著性檢驗
通過統計分析表明，2023年與2023年花蜜含糖量存在極顯著差異；澱粉含量也存在極顯著差異；c/n間差異顯著，即2023年花蜜含糖量、澱粉含量及c/n明顯高於2023年。2023年與2023年間花蜜含糖量間差異極顯著；澱粉間差異顯著，即2023年花蜜含糖量及澱粉含量明顯高於2023年。2023年與2023年花蜜含糖量間差異顯著，即2023年花蜜含糖量顯著高於2023年。
④1995、1996、1997 三年中北京刺槐花蜜含糖量與各營養指標間相關關係的分析結果，見表9，其迴歸直線圖見圖56。
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表9 北京2023年、2023年、2023年三年間刺槐花期花蜜含糖量與其休眠期生理指標間相關關係
經統計分析，可以看出（1）刺槐休眠期總糖含量與花蜜含糖量間相關關係顯著，p＜0.05，呈正相關。即休眠期枝條總糖含量越高，來年花蜜含糖量就越高。
（2）刺槐休眠期枝條澱粉含量與來年花蜜含糖量間相關關係顯著，p＜0.05，呈正相關，即休眠期枝條中澱粉含量越高，來年花蜜含糖量就越高。（3）刺槐休眠期枝條中可溶性糖、蛋白質含量及c/n與來年花蜜含糖量間相關關係不顯著，p＞0.
05，即休眠期刺槐枝條中可溶性糖、蛋白質含量及c/n的高低對來年花蜜含糖量無直接明顯影響；但花蜜含糖量與蛋白質含量呈負相關。
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圖56 花蜜含糖量與枝條澱粉及總糖含量的迴歸直線圖
⑤北京刺槐花蜜含糖量在不同年份，不同樹號的平均值，見表 10、表 1 1、表 12。
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表10 北京2023年度花蜜百朵花泌蜜指標（克）
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表11 北京2023年度花蜜百朵花泌蜜指標（克）
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表12 北京2023年度花蜜100朵花泌蜜指標（克）
從表 10、表 11、表 12 中可以看出，2023年度刺槐花平均含糖量最高，2023年次之，2023年最低。
⑥2023年，2023年和 2023年三年中北京刺槐花期各棵樹不同年份間花蜜含糖量差異顯著性檢驗分析記及日泌蜜情況，見表13、表 14、表 15、表 16、表 17、表 18。
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表13 北京2023年刺槐日泌蜜情況（100朵花平均值計）（克）
注：表中**表示未測定。
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表14 北京2023年刺槐日泌蜜情況（100朵花平均值計）（克）
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表15 北京2023年刺槐日泌蜜情況（100朵花平均值計）（克）
注：表中**表示未測定。
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表16 北京2023年、2023年兩年間各棵樹花蜜含糖量差異顯著性檢驗
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表17 北京2023年、2023年兩年間各棵樹花蜜含糖量差異顯著性檢驗
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表18 北京2023年、2023年兩年間各棵樹花蜜含糖量差異顯著性檢驗
從表 16、表 17、表 18 中可以看出，19 9 5年和 19 9 6 年刺槐花期花蜜含糖量各棵樹都有顯著和極顯著的差異，即 19 9 6年各棵樹的花蜜含糖量分別顯著或極顯著地高於2023年。2023年和2023年兩年間刺槐花期花蜜含糖量各棵樹差異程度不同，1號樹差異顯著，p＜0.01；4號樹差異不顯著。
這說明2023年1號樹花蜜含糖量顯著高於2023年；2號樹，3號樹及5號樹花蜜含糖量極顯著地高於2023年；而4號樹花蜜含糖量則差異不顯著。2023年和2023年兩年間刺槐花期花蜜含糖量各棵樹都有極顯著的差異，即2023年各棵樹花蜜含糖量都極顯著地高於2023年。
（4）結論
①實驗結果表明，刺槐休眠期總糖含量及澱粉含量與來年花蜜含糖量相關關係顯著（p＜0.05），呈高度正相關。刺槐休眠期總糖、澱粉含量高，是來年植物體開花泌蜜，花蜜含糖量高的重要營養基礎。
②刺槐休眠期可溶性糖、蛋白質含量及c/n與來年花蜜含糖量間相關關係不顯著，p＞0.05，即休眠期刺槐枝條中可溶性糖，蛋白質含量及c/n的高低對來年花蜜含糖量的高低無顯著影響。蛋白質含量與來年花蜜含糖量間呈弱負直線相關，r＝－0.
1869，但在統計學上表現為不顯著。
③氣候條件對花蜜濃度影響較大。早晨花蜜濃度最低，中午達最高，下午又開始逐漸降低。這主要是由於隨著氣溫升高和溼度減小，花蜜中水分蒸發加快而造成濃度升高。
氣候條件是影響花蜜濃度的外因，而休眠期樹體總糖及澱粉含量的積累則是影響花蜜濃度的內因。
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