1樓：匿名使用者
一、實驗步驟：
（1）樣品製備：對於貼壁生長細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1×105/ml，滴加於蓋玻片上(置於6孔板中)，培養相應時間後，取出細胞爬片，用pbs 洗滌3次。
（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，pbs洗滌2次，每次1min。
（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。
（4）分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數秒，自來水洗滌。
（5）染胞質：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。
（6）吹乾或自然晾幹細胞 爬片後，中性樹膠封片。
若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。
二、注意事項：
1、染色時調節ph值很重要。如果組織塊在****中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。
染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染蘇木精後，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色後再行分色。
3、切片經酒精脫水後，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。
4、在染色過程中不要讓切片乾燥，以免切片收縮、變形，影響神經元形態。
5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦乾淨或吸乾多餘水分。
6、最後封固時，要用中性樹脂，防止日後褪色，蓋片要選大於組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。
擴充套件資料
一、細胞核染色原理：
蘇木精為鹼性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是dna，在dna的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。
使dna雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
二、細胞漿染色原理：
細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與ph值有密切關係，當ph調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或鹼性染料不易染色。
當ph調到6.7-6.8時，大於蛋白質的等電點ph值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。
因此必須把ph調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。
伊紅y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
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zt一 取材和固定
取材後經固定24小時（4%pa灌注取材的後固定6~8小時）以後，流水沖洗24小時，置於70%~80%乙醇中，可長期儲存。
二 脫水和包埋
1、95%alc（二道） ⅰ 2~4h
ⅱ 2h
2、無水alc（二道） ⅰ 1.5h
ⅱ 1h
3、二甲苯+無水乙醇（1：1） 20min
4、二甲苯（二道） ⅰ 10min
（注：脫水透明esp.透明時間可適當延長） ⅱ 10min
5、浸軟蠟（50~52℃）（二道） ⅰ 30min
ⅱ 1h
6、浸硬蠟（58~60℃）（二道） ⅰ 30min
ⅱ 30min
7、包埋：注意溫度、切面。
三 切片
修、切、展、貼、烤（烤片55~60℃） 3~10h
四 he染色
1、二甲苯脫蠟 五道，每道5~10分鐘
2、無水乙醇 ⅰ 5min
ⅱ 5min
3、95%乙醇 ⅰ 5min
ⅱ 5mn
4、80%乙醇 5min
5、70%乙醇 5min
6、d．w． 3~5min
7、harris蘇木素液 5min（冬天可適當延長，eg.20min）
8、水洗
9、0.5%鹽酸酒精分色 3~10seconds，鏡下觀察
10、水洗藍化 15~30min（注意換水）
11、70%乙醇 5min
12、80%乙醇 5min
13、伊紅液（95%乙醇溶液） 3~30seconds
14、95%乙醇 ⅰ 1min
ⅱ 5min
15、無水乙醇 ⅰ 5min
ⅱ 5min
16、二甲苯+乙醇（1：1） 5min
17、二甲苯 ⅰ 5min
ⅱ 5min
ⅲ 5min
18、中性樹膠封片。
he染色注意事項：
1. 染色時調節ph值很重要。如果組織塊在****中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。
因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染蘇木精後，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色後再行分色。
3. 切片經酒精脫水後，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。
4. 在染色過程中不要讓切片乾燥，以免切片收縮、變形，影響神經元形態。
5. 切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦乾淨或吸乾多餘水分。
6. 最後封固時，要用中性樹脂，防止日後褪色，蓋片要選大於組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。
蘇木精—伊紅染色法簡稱he染色法，它是最常用的普通染色方法。蘇木精（hematoxylin）是陽離子染料，將細胞核內的嗜鹼性物質染成藍紫色。伊紅（eosin）是陰離子染料，將細胞質和膠原纖維等染成粉紅色。
3樓：tcoo_阿西
he染色步驟：
1、脫蠟，脫蠟二甲苯ⅰ、ⅱ各10分鐘，事先準備好蓋玻片。
2、覆水，100%（ⅰ、ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分鐘，自來水沖洗5分鐘×3。
3.、蘇木精染色5分鐘，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。
4、5%乙酸分化1分鐘，流水沖洗，用吸管滴加乙酸，佈滿玻片上的組織即可，分化後顏色變淺了一些，成為藍色。
5、返藍：返藍液，實驗室沒有，也可不用。
6、伊紅染色1分鐘，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。
7、脫水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分鐘，可以在通風櫥自然晾乾再封
片，約5分鐘左右。
8、滴上中性樹膠，封片，用吸管滴上一滴即可，儘量少滴，但壓片後要將組織全部覆蓋完，避免中間有氣泡。
he染色的操作步驟
4樓：tcoo_阿西
he染色步驟：
1、脫蠟，脫蠟二甲苯ⅰ、ⅱ各10分鐘，事先準備好蓋玻片。
2、覆水，100%（ⅰ、ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分鐘，自來水沖洗5分鐘×3。
3.、蘇木精染色5分鐘，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。
4、5%乙酸分化1分鐘，流水沖洗，用吸管滴加乙酸，佈滿玻片上的組織即可，分化後顏色變淺了一些，成為藍色。
5、返藍：返藍液，實驗室沒有，也可不用。
6、伊紅染色1分鐘，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。
7、脫水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分鐘，可以在通風櫥自然晾乾再封
片，約5分鐘左右。
8、滴上中性樹膠，封片，用吸管滴上一滴即可，儘量少滴，但壓片後要將組織全部覆蓋完，避免中間有氣泡。
5樓：筱曉小魚兒
將石蠟切片置於烘箱中60℃烤1～2h；
石蠟切片常規二甲苯，乙醇脫蠟至水，
蘇木素染10分鐘，
流水沖洗，去餘色，
0.7%鹽酸乙醇分化數秒鐘，
流水沖洗，切片變藍約15分鐘，
7.95%乙醇30秒鐘，
8.酒精性伊紅染30秒，
i 95%乙醇30秒鐘，
ii 95%乙醇30秒鐘，
i 100%乙醇30秒鐘，
ii100%乙醇30秒鐘，
石碳酸二甲苯30秒鐘，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）i二甲苯30秒鐘，
ii二甲苯30秒鐘，
中性樹膠封片。
he染色操作流程：
he染色，即是蘇木精-伊紅染色法，是形態學最常用的染色方法，在質量較佳的he染色切片上，各種組織或細胞的一般形態結特點都可以觀察到。蘇木精染液為鹼性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。
6樓：北京索萊寶科技****
【試劑材料]】
1.試劑：0.5%醇溶性伊紅染液，改良的哈瑞（harris）蘇木素，0.5%鹽酸酒精溶液
1.1 伊紅：
配製方法：中性紅 0.5g，80%酒精100ml,將伊紅溶於酒精內攪拌，全部溶解後即可使用。
1.2蘇木精：
配製方法：a液： 蘇木素1g，無水酒精10ml
b液：硫酸鋁鉀20g，蒸餾水200ml
兩液分別溶解後混合，加熱煮沸後，慢慢加入紅色氧化汞0.5g，此時有大量氣泡產生，故容器要大，以防液體溢位，然後將染液迅速冷卻，冷卻後過濾，並每100ml加入冰醋酸6ml，甘油10ml。
1.3 0.7%鹽酸酒精溶液
配製方法：鹽酸0.7ml，70%酒精100ml
2.材料：石蠟切片
[操作流程]
1.將石蠟切片置於烘箱中60℃烤1～2h；
2.石蠟切片常規二甲苯，乙醇脫蠟至水，
3.蘇木素染10分鐘，
4.流水沖洗，去餘色，5.0.7%鹽酸乙醇分化數秒鐘，
6.流水沖洗，切片變藍約15分鐘，
7.95%乙醇30秒鐘，
8.酒精性伊紅染30秒，
9.i 95%乙醇30秒鐘，
10.ii 95%乙醇30秒鐘，
11.i 100%乙醇30秒鐘，
12.ii100%乙醇30秒鐘，
13.石碳酸二甲苯30秒鐘，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）
14.i二甲苯30秒鐘，
15.ii二甲苯30秒鐘，
16.中性樹膠封片。
[實驗結果]： 鏡下觀察細胞核呈藍色；細胞漿一般呈紅色；膠原纖維呈不同程度的紅色，紅細胞呈亮紅色；
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