1樓:匿名使用者
你說的是高中的pcr擴增技術,你可以具體將課本再看看
pcr引物是什麼?
2樓:點點星光帶晨風
聚合酶鏈式反應簡稱pcr(polymerase chain reaction) (又稱:多聚酶鏈式反應) pcr是體外酶促合成特異dn**段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等反應組成一個週期,迴圈進行,使目的dna得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
它不僅可用於基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用於疾病的診斷或任何有dna,rna的地方。pcr又稱無細胞分子克隆或特異性dna序列體外引物定向酶促擴增技術。
3樓:暴走少女
pcr引物又稱為寡核苷酸引物,也就是rna,是由人工合成的,分為兩種,引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進行復制,也就是隻能識別3'的尾端。
而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上,所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部(就是末尾是3'端的那一邊)結合,為那些脫氧核苷酸提供3'的末端,就相當於開了個頭。然後在dna聚合酶的作用下合成兩條新鏈。而那段引物就成了新鏈的一部分。
4樓:白色的妖精
通俗的講,引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料。
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體。試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物。
2、提純的dna。如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司。dna純度要求可以做pcr。
ps:很佩服樓主充足的經費,我們這裡同定一次要2800人民幣......
5樓:匿名使用者
pcr的目的是大量擴增你所需要的片斷。換句話說,就是用人工的方法大量複製dna。而dna的複製是以一條鏈為模板,新合成鏈按照鹼基互補配對進行的。
可是有一個問題,dna的合成必須是前端有一小段序列,他接著這段序列合成,而不能從無到有,憑空合成。它前面這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是dna也可以是rna,一般20多bp.
需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物
pcr中,引物是什麼意思?
6樓:淵源
引物就是為了增幅bai目的dna而導du入的短小dn**斷,在zhipcr反應中,新合成的dna是要接在引dao物上才能繼續按照模
專版dna複製屬.引物的設計因需要增幅的序列而不同.舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料.
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體.試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物.
2、提純的dna.如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司.dna純度要求可以做pcr.
什麼是pcr?
7樓:鬆恭載琬
pcr(polymerase
chain
reaction
)即聚合酶鏈式反應
pcr技術的基本原理:該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,藉助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3 ́-oh末端,並以此為起始點,沿模板5 ́→3 ́方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
pcr反應的基本成分包括:模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:1模板dna的高溫變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;2模板dna與引物的低溫退火(復性):
模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;3引物的適溫延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna
鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘,
2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
8樓:柚夏
pcr是聚合酶鏈式(polymerase chain reaction)反應的簡稱,是一種將幾個或幾十個拷貝數dn**段擴增至上百萬份拷貝的方法,這是迄今為止最為重要的技術之一。pcr技術的影響不僅僅侷限於生物科學領域,幾乎人人都可以感受到pcr所帶來的改變,在親子鑑定以及犯罪調查中pcr技術便有廣泛應用。
pcr可以被認為是與發生在細胞內的dna複製過程相似的技術,其結果都是以原來的dna為模板產生新的互補dn**段。細胞中dna的複製是一個非常複雜的過程。參與複製的有多種因素。
pcr是在試管中進行的dna複製反應,基本原理與細胞內dna複製相似,但反應體系相對較簡單。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1模板dna的變性:模板dna經加熱至94°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在taq酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
參考資料
pcr技術原理.丁香通[引用時間2018-5-11]
9樓:春玉英進婷
pcr是聚合酶鏈式反應。這個反應的發生需要目標dna,也需要聚合酶(要不怎麼叫聚合酶鏈式反應呢?)還有4種脫氧核苷酸a、g、c、t。
(注意,a、g、c、t是他們的鹼基,在一定情況下也能指代核糖核苷酸核苷酸或脫氧核苷酸。)
我估計能問這個問題的人不是個初學者就是個高深莫測的人......
10樓:自由之聲了
是手遊princess connect!re dive(公主連結r)的簡稱
11樓:匿名使用者
聚合酶鏈鎖反應,polymerase chain reaction,簡稱pcr,是一種分子生物學技術,用於放大特定的dn**段。可看作生物體外的特殊dna複製。
※pcr基本原理
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1模板dna的變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需 2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
到達平臺期所需迴圈次數取決於樣品中模板的拷貝。
※pcr反應特點
特異性強
pcr反應的特異性決定因素為:
1引物與模板dna特異正確的結合;
2鹼基配對原則;
3taq dna聚合酶合成反應的忠實性;
4靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循鹼基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及taq dna聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。
再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
靈敏度高
pcr產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10- 12)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,pcr的靈敏度可達3個rfu(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。
簡便、快速
pcr反應用耐高溫的taq dna聚合酶,一次性地將反應液加好後,即在dna擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性汙染、易推廣。
對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,dna 粗製品及rna均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛髮、細胞、活組織等dna擴增檢測。
12樓:麥兜櫻
pcr就是一種用來大量複製目的基因的生物技術